Inmunolocalización y caracterización de Flavin Monooxigenasa en Fasciola hepatica susceptible y resistente a triclabendazole

LAMENZA P.; SCARCELLA S.; CERIANI C.; SOLANA H.

Jornada; SEGUNDAS JORNADAS DE JÓVENES INVESTIGADORES EN CIENCIAS VETERINARIAS; 2012

FCV-UBA

La fasciolosis, es una zoonosis emergente producida por el trematodo Fasciola hepatica con ubicación en el hígado de animales herbívoros y el hombre. Ante una fasciolosis se utiliza triclabendazole (TCBZ), un antihelmíntico benzimidazólico halogenado, que despolimeriza los microtúbulos del parásito provocando la pérdida de función y posterior muerte. Hoy, el uso indiscriminado de TCBZ ha generado en diversas regiones del mundo cepas resistentes a dicho fasciolicida. Trabajos previos en nuestro laboratorio demuestran que una de las causas de la expresión del fenómeno de resistencia a TCBZ por parte de F. hepatica sería debido a una sobreexpresión de la actividad enzimática de la vía Flavin Monooxigenasa (FMO) pero se desconoce si la misma es debida a la sobreexpresión del mRNA correspondiente o a mutaciones puntuales del gen que codifica para FMO. Los objetivos del presente trabajo fueron I) Localizar la presencia de Flavin Monooxigenasa en adultos de Fasciola hepatica sensibles y resistentes a TCBZ y II) Analizar la expresión de los mRNA correspondientes. Los estudios inmunohistoquímicos se realizaron sobre cortes de 5 m de adultos analizados con un anticuerpo monoclonal dirigido contra FMO y según el método PAP. Los análisis de RT-PCR se llevaron a cabo a partir de RNA total obtenido de adultos de F. hepatica sensible y resistente a TCBZ.Mientras que en los estudios inmunohistoquímicos no se detectaron diferencias en la distribución de FMO en ambas cepas, en los estudios genéticos se detectaron diferencias significativas en la expresión de mRNA entre las cepas sensibles y resistentes. En el caso de la cepa resistente, la expresión del mRNA correspondiente a FMO fue 1.5 veces mayor que en la sensible; cuantificado mediante el programa ImageJ. Se confirma que las enzimas FMOs no solo estarían involucradas en los mecanismos de detoxificación, sino que también participarían activamente en el desarrollo del fenómeno de resistencia al antihelmíntico fasciolicida TCBZ por parte del trematodo.