IQUIBICEN   23947
INSTITUTO DE QUIMICA BIOLOGICA DE LA FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Las vesículas extracelulares producidas por Bacillus subtilis liberan ARN y atraviesan de manera intacta células intestinales humanas Caco-2
Autor/es:
DOMÍNGUEZ RUBIO, AP; MARCILLA, A; MARTÍNEZ, JH; PIURI, M; SÁNCHEZ LÓPEZ, CM; PÉREZ, OE
Reunión:
Jornada; II Jornadas de Jóvenes Bionanocientíficxs; 2020
Institución organizadora:
IQUIBICEN-CONICET, CIBION-CONICET, INS-UNSAM e Instituto Leloir
Resumen:
Las Vesículas Extracelulares (EVs) bacterianas se han relacionado con la comunicación entre reinos. Es decir entre las bacterias (probióticas o patógenas) y sus hospedadores como el ser humano. Las VEs están formadas por una bicapa lipídica de membrana y contienen componentes citoplasmáticos como ADN, ARN y proteínas.Nuestro objetivo fue investigar si las EVs B. subtilis, 115±27 nm, pueden atravesar de manera intacta células Caco-2 diferenciadas en monocapa utilizadas como un modelo in vitro de barrera intestinal. A su vez, quisimos estudiar la localización celular de los ARN contenidos en las EVs bacterianos en células eucariotas. Mediante Microscopía Confocal, comprobamos que la internalización de las EVs de B. subtilis marcadas con CFSE por las células Caco-2 es tiempo dependiente. Con el objetivo de estudiar el proceso de transcitosis, es decir que las EVs bacterianas puedan ser transportadas de manera íntegra a través las células Caco-2 desde la cara apical a la cara basal, las células Caco-2 fueron sembradas y diferenciadas en un sistema transwell. Las EVs marcadas con CFSE fueron sembradas en la cámara superior y luego a diferentes tiempos de incubación (0, 5, 15, 30, 45, 60, 120 y 240 min) las EVs fueron cuantificadas en la cámara inferior por mediciones de Fluorescencia y Nanoparticle Tracking Analysis. También, fueron observadas por Microscopía de Fluorescencia. EVs intactas fueron transportadas a través de la monocapa las células intestinales polarizadas a los 120 min y aumentaron a los 240 min en un 30%. Este proceso, a su vez, resultó ser dosis-dependiente. Realizando una doble marcación de las EVs, con SYTO RNA green (ARN) y BODIPY TR Ceramide red (membrana plasmática), e incubándolas con células Caco-2 sin diferenciar. Por Microscopía Confocal, observamos que el ARN de las EVs colocalizaban con el núcleo celular marcados con DAPI. En cambio, la bicapa liídica de las EVs permaneció en el citoplasma de las células. En este trabajo demostramos que las VEs bacterianas pueden ser transportadas a través del células del epitelio gastrointestinal y especulamos que este mecanismo podría ser el primer paso que permita que las VEs llegar al torrente sanguíneo del hospedador y así poder llegar a los tejidos y órganos de todo el cuerpo donde se han demostrado efectos de los probióticos en el hospedador. A su vez, Los ARN bacterianos podrían acceder al núcleo celular eucariota y esto podría tener algún efecto en la modulación de la expresión de genes. A futuro, la expresión y posterior encapsulación de moléculas bioactivas como ADN, ARN, y/o proteínas en estas nanopartículas naturales producidas por bacterias probióticas podría tener implicaciones en terapias clínicas y en la industria de los alimentos y nutracéuticos.nutracéutica.