ESTRÉS OXIDATIVO INDUCIDO POR EL INSECTICIDA CLORPIRIFOS EN CÉLULAS ENDOTELIALES

BRITEZ NEIRA DIEGO; GAZZANIGA, SILVINA; ROCCO, RODRIGO; COCHÓN ADRIANA

Capital Federal-Buenos AIres

Jornada; IX JORNADAS DE JÓVENES INVESTIGADORES; 2019

Facultad de veterinaria - UBA

Durante las últimas décadas, el uso de plaguicidas ha aumentado constantemente en un esfuerzo por aumentar la producción de alimentos y controlar las enfermedades transmitidas por vectores. El clorpirifos (O,O′-dietil O-3,5,6-tricloro-2-piridil fosforotioato, CPF) es un insecticida organofosforado (OP) de amplio uso en la actividad agrícola y doméstica en la Argentina y en todo el mundo. La exposición a contaminantes ambientales como el CPF produce en los organismos inhibición de la enzima acetilcolinesterasa y una cascada de respuestas biológicas y múltiples efectos tóxicos. En particular, los OPs tienen el potencial de generar especies reactivas de oxígeno (ROS) y/o dañar el sistema de defensa antioxidante celular, lo que deriva en estrés oxidativo. Recientemente varios autores han reportado disfunción endotelial inducida en roedores por la exposición a CPF. Sin embargo, poco se sabe sobre el papel del endotelio en las intoxicaciones con insecticidas OPs. El objetivo de este trabajo fue determinar el efecto de diferentes concentraciones de CPF (0, 10, 30 y 50 µM) sobre biomarcadores de estrés oxidativo en células endoteliales de ratón (H5V). Las células se cultivaron a 37ºC y al 5% CO 2 en estado de subconfluencia con medio DMEM suplementado con glutamina y 5% de suero fetal bovino (FBS) decomplementado. El CPF fue disuelto en acetona y el tratamiento se realizó por 24 horas. El rango de concentracionesseleccionado para el diseño experimental se encuentra dentro de los rangos utilizados enestudios in vitro previamente publicados. Los parámetros bioquímicos analizados fueron la actividad de la enzima antioxidante catalasa (CAT) y los niveles de glutatión reducido (GSH) y oxidado (GSSG). La actividad CAT se midió espectrofotométricamente monitoreando la descomposición del peróxido de hidrógeno. Los niveles de GSH y GSSG se determinaron utilizando el método de reciclado. Se observó que luego del tratamiento de las células con 10 y 30 µM de CPF la actividad CAT aumentó en 49±12% y 21±10%, respectivamente. En cambio a 50 µM el pesticida produjo una significativa disminución del 69±1% de la actividad enzimática. En el caso del antioxidante no enzimático, se observó una disminución de la relación GSH/GSSG del 44±22% y del 55±6% para las concentraciones de CPF de 30 y 50 µM, respectivamente, sin modificaciones a 10 µM. En cuanto a la morfología celular, a las concentraciones más bajas no se observaron cambios significativos mientras que a 50 µM se observó cierta pérdida de la adherencia pero aún sin evidencias de muerte. En conclusión, a 24 hs de tratamiento, los cambios en CAT, estado redox y la ausencia de muerte celular sugieren la existencia de una injuria oxidante que las células lograron controlar. Estudios a tiempos más largos permitirán evaluar si el pesticida induce modificaciones en funciones relevantes de la célula endotelial o eventualmente la muerte celular.