Efecto de moduladores de la vía de señalización celular p38 sobre la multiplicación del virus Junín en cultivos celulares

SCOLARO, LA; CASTILLA, V; BRUNETTI, JE

Buenos Aires

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología, V Congreso Argentino de Microbiología de Alimentos, V Congreso Latinoamericano de Microbiología de Medicamentos y Cosméticos, XIV Congreso Argentino de Microbiología General; 2019

Asociación Argentina de Microbiología

Introducción y Objetivos: La vía de señalización celular p38, que forma parte de las rutas de transducción de señales dependientes de proteínas quinasas activadas por mitógenos (MAP quinasas), está involucrada en la replicación de diversos virus. En trabajos previos comprobamos que el arenavirus Junín (JUNV), agente causal de la fiebre hemorrágica argentina, induce la activación de p38 en células Vero y demostramos que el compuesto SB203580, inhibidor específico de la vía, reduce el rendimiento viral y la expresión de proteína viral en esta línea celular. El objetivo de este trabajo fue examinar el estado de activación de p38 en las líneas celulares humanas HeLa y HEK293 y evaluar el efecto de moduladores de p38, el compuesto SB202190 (inhibidor de la vía) y la anisomicina (activador de la vía) sobre la multiplicación de JUNV en células Vero, HeLa y HEK293. Materiales y Métodos: La citotoxicidad de los compuestos a ensayar se examinó por el método del MTT. Para determinar el efecto de los moduladores sobre la multiplicación viral las células se infectaron con JUNV (MOI = 1) y se trataron con cada compuesto durante 24 h. A este tiempo se cuantificó el título de virus liberado al sobrenadante por el método de formación de placas. Por otra parte, la expresión de proteína viral de nucleocápside (N) se analizó mediante ensayos de inmunofluorescencia y western blot. Los niveles de p38 fosforilada (P-p38) en células sin infectar o infectadas, tratadas o no con los moduladores, se determinaron por western blot.Resultados: Se comprobó que, a diferencia de lo observado en las células Vero, la infección con JUNV no indujo un incremento en los niveles de P-p38 en las células HeLa y HEK293. Sin embargo, la presencia de concentraciones no citotóxicas de SB202190 inhibió de manera significativa la producción de virus observándose, en la máxima concentración de compuesto ensayada, una reducción del 99,57%, 90,70% y 90,72% del título viral en células Vero, HeLa y HEK293, respectivamente. Asimismo, el tratamiento con el inhibidor también provocó una marcada disminución de la expresión de la proteína viral N en las tres líneas celulares utilizadas. El análisis por western blot permitió corroborar que la inhibición de la multiplicación viral estaba asociada a una disminución en los niveles de activación de la vía p38. Por otro lado, el tratamiento con el compuesto anisomicina no afectó de manera significativa ni el rendimiento viral ni la expresión de la proteína viral N. Conclusiones: En conclusión, si bien la inducción de la vía p38 mediada por JUNV es dependiente del tipo celular, tanto en las células Vero como en las células de origen humano la inhibición de la vía reduce de forma notoria la multiplicación de JUNV. Por el contrario, la activación de la cascada de señalización no tiene efecto sobre la producción viral. Estos resultados sugieren que los niveles basales de activación de la vía serían suficientes para promover la multiplicación de JUNV.