Actividad antiviral de alcaloides de origen vegetal frente a los virus zika y dengue

PICCINI, LE; BRUNETTI, JE; GIANNONNE, DA; CASTILLA, V

Buenos Aires

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología, V Congreso Argentino de Microbiología de Alimentos, V Congreso Latinoamericano de Microbiología de Medicamentos y Cosméticos, XIV Congreso Argentino de Microbiología General; 2019

Asociación Argentina de Microbiología

Introducción y Objetivos: Los flavivirus dengue (DENV) y Zika (ZIKV) son importantes patógenos humanos para los cuales no se dispone de una terapia antiviral específica. En trabajos anteriores habíamos demostrado la actividad antiviral del harmol, una ß-carbolina de origen vegetal, frente a DENV. En este trabajo se investigó la actividad antiviral de alcaloides de origen vegetal como las ß-carbolinas harmol, harmina, harmano y norharmano frente a ZIKV y el alcaloide isoquinolínico berberina frente DENV y ZIKV, en cultivos de células Vero. Materiales y Métodos: La citotoxicidad de los compuestos se determinó por el método de MTT y se calculó la CC50 (concentración citotóxica 50%). La actividad antiviral de los compuestos se evaluó realizando un ensayo de inhibición del rendimiento viral. La infectividad se cuantificó por el método de formación de placas y se calculó la CE50 (concentración efectiva 50%). La expresión de la proteína viral E se analizó mediante ensayos de inmunofluorescencia indirecta y de western blot. Para cuantificar el efecto virucida de la berberina, alícuotas de virus se incubaron con diferentes concentraciones de compuesto y se cuantificó la infectividad remanente.Resultados: De las ß-carbolinas ensayadas, sólo el harmol exhibió efecto inhibitorio frente a ZIKV (CE50: 26,1 µM). Por otra parte, la berberina inhibió la multiplicación de ZIKV y de todos los serotipos de DENV obteniéndose valores de CE50 de 5,7 µM, 9,1 µM, 2,4 µM, 11,6 µM and 6,3 µM para ZIKV, DENV-1, -2, -3 y -4, respectivamente. El análisis de la expresión de la glicoproteína E mediante ensayos de inmunofluorescencia mostró que la berberina produjo además la reducción significativa del número de células infectadas. La presencia de berberina durante las primeras 8 h de la infección no afectó la producción de DENV o ZIKV, mientras que el tratamiento con el compuesto entre las 8 y las 24 h post-infección provocó la reducción del rendimiento viral y de la expresión de proteína viral E. Se examinó también el efecto de la berberina sobre la producción de partículas virales intra- y extra-celulares y se demostró que el compuesto afecta la formación de las partículas virales infecciosas. Por último, se comprobó que este compuesto posee además efecto virucida frente a DENV y ZIKV. Conclusiones: De las ß-carbolinas ensayadas, solamente el harmol mostró actividad antiviral frente a ZIKV, mientras que el compuesto berberina inhibió de manera dosis-dependiente la multiplicación de todos los serotipos de DENV y de ZIKV en células Vero. La berberina afectaría eventos tardíos de la replicación viral, impidiendo la formación de partículas virales infecciosas. Sumado a esto, el compuesto berberina es capaz de provocar la inactivación directa de las partículas virales.