REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN DE LAS SUBUNIDADES DE LA PROTEÍNA QUINASA A EN SACCHAROMYCES CEREVISIAE

CAÑONERO, L; ORTOLÁ, MC; PAUTASSO, C; PIETRASANTA, L; SIGAUT, L; ROSSI, S

Madrid

Jornada; III JORNADA DE PhDAY FACULTAD DE FARMACIA UCM 2019; 2019

Universidad Complutense de Madrid, Facultad de Farmacia

La holoenzima PKA (proteína quinasa A) en Saccharomyces cerevisiae está formada por dos subunidades de las tres posibles isoformas de subunidad catalítica (codificadas por los genes TPK1, TPK2 y TPK3) y dos subunidades regulatorias (codificada por un único gen BCY1). La PKA controla diversos eventos celulares en respuesta a diferentes estímulos y la especificidad de la señal cAMP-PKA (actividad dependiente de la concentración de cAMP celular) es mantenida mediante diferentes niveles de control. Uno de ellos es la regulación de la expresión de las subunidades que componen a la quinasa. En particular estudiamos cómo resulta la expresión de las subunidades de PKA durante el estrés térmico a 37°C. Sabemos que el promotor de cada una de las subunidades es diferencialmente regulado durante dicho estrés: el de TPK1 es el único que resulta inducido, mostrando además un aumento en los niveles de su mRNA. Por otro lado, el promotor de BCY1 presenta una baja actividad durante el estrés pero niveles altos de abundancia de su mRNA. El análisis de estabilidad de dichos mRNAs indica que la vida media del mRNA de BCY1 es mayor que la del mRNA de TPK1 (25°C) y que ambos incrementan su estabilidad frente al estrés térmico. Asimismo, hemos corroborado que los promotores de las subunidades y las secuencias de sus 5?UTRs afectan la estabilidad de sus mensajeros. Sin embargo, al analizar los niveles de la proteina Tpk1 no se indican cambios significativos durante el estrés térmico pero sí se registra un aumento considerado cuando la célula se somete a un segundo estrés. En contraste, la proteína Bcy1 permanece sin modificaciones. Analizando la localización in vivo mediante la técnica mTAG1, el mensajero de TPK1 durante el estrés térmico se observó localizado en gránulos citoplasmáticos resistentes a cicloheximida. Por último, analizando el perfil ribosomal a 37°C observamos que el mRNA de TPK1 está más asociado a la fracción de mRNA libre y menos a la fracción polisomal, revelando una disminución en la traducción. En conjunto, en respuesta al estrés térmico, los mRNAs de las subunidades de PKA son diferencialmente expresados y más estables; el mRNA de TPK1 es inducido y forma gránulos y no se traduce hasta que la célula logra abandonar las condiciones de estrés y se enfrenta nuevamente a una situación favorable.