LA SUMOILACIÓN DE AKT ES REQUERIDA PARA LA INDUCCIÓN DEL PROMOTOR DE NANOG EN CELULAS MADRE EMBRIONARIAS

COSENTINO, MARÍA SOLEDAD; TORO, AYELEN; BARAÑAO, LINO; FRANCIA, MARCOS; SOLARI, CLAUDIA; WAISMAN, ARIEL; VAZQUEZ ECHEGARAY, CAMILA; PETRONE, MARÍA VICTORIA; GUBERMAN, ALEJANDRA

Chascomús

Taller; IV Taller de Biología Celular y del Desarrollo; 2018

IIB-INTECH

Las células madre embrionarias (CME) son células derivadas del macizo celular interno de blastocistos. Tienen la capacidad de auto-renovarse indefinidamente y de diferenciarse a =pos celulares de las tres capas germinales. Este estado pluripotente es mantenido en parte por el Factor Inhibidor de la Leucemia (LIF) incluido en el medio de cul=vo que con=ene además suero fetal bovino. La vía de PI3K/ AKT es ac=vada por LIF y es crucial para el mantenimiento de la expresión y ac=vidad de los factores de transcripción fundamentales en CME, Oct4, Sox2 y Nanog. En los úl=mos años fue reportado que la SUMOilación de Akt1 regula la ac=vidad de esta quinasa, con consecuencias directas en el patrón de splicing, crecimiento celular y supervivencia en diferentes líneas celulares. Sin embargo, el rol de esta modificación post-traduccional (MPT) de Akt1 aún no ha sido estudiada en CME. Nuestra hipótesis postula que la SUMOilación de Akt1 es relevante para el mantenimiento de las propiedades fundamentales de CME. El obje=vo del presente trabajo es estudiar el efecto de dicha MPT de Akt1 sobre la ac=vidad del promotor de Nanog. Para ello co-transfectamos CME con vectores de expresión de variantes de Akt1 con diferente capacidad de ser SUMOiladas junto con un vector reportero del sistema Luciferasa controlado por el promotor de Nanog. Para el análisis estadís=co u=lizamos Modelos Lineales Mixtos. Observamos que las variantes de Akt1 que pueden ser SUMOiladas inducen la ac=vidad de este promotor, mientras que este efecto no se observa con aquellas variantes cuya SUMOilación se ve disminuida. Esto sugiere que la SUMOilación de Akt1 es importante para la inducción de Nanog. Con el propósito de estudiar el mecanismo molecular involucrado, analizamos la posible par=cipación de GSK3-B, STAT3 y p53. Para ello realizamos tratamientos con 2i, ausencia de LIF o u=lizamos una línea celular de CME p53 knockout, generada en nuestro laboratorio. Nuestros resultados sugieren que ninguno de estos factores seria mediador del efecto encontrado. Actualmente nos encontramos estudiando otros posibles intermediarios involucrados.