EL GEN DE HEMOOXIGENASA-1 ES REPRIMIDO POR EL FACTOR DE TRANSCRIPCIÓN FUNDAMENTAL DE CÉLULAS MADRE PLURIPOTENTES OCT4

TORO, AYELEN; COSENTINO, MARÍA SOLEDAD; GUBERMAN, ALEJANDRA; PETRONE, MARÍA VICTORIA; SOLARI, CLAUDIA; ELBA VAZQUEZ; VAZQUEZ ECHEGARAY, CAMILA; FRANCIA, MARCOS

Chascomús

Taller; IV Taller de Biología Celular y del Desarrollo; 2018

IIB-INTECH

Las células madre embrionarias (CME) son capaces de diferenciarse, dando lugar a células de las tres capas embrionarias, y además poseen varios mecanismos moleculares que aseguran la estabilidad del genoma, evitando así la posible propagación de daño. La Hemooxigenasa-1 (HO-1) es la enzima limitante del catabolismo oxida=vo del grupo hemo y, en par=cular, la isoforma inducible HO-1 posee ac=vidad an=-apoptoó=ca y an=oxidante. Su acción se encuentra ampliamente estudiada en células madre mul=potentes, sin embargo, poco se sabe acerca de su regulación en células madre pluripotentes (CMP). Hemos encontrado previamente que HO-1 es inducida durante la diferenciación de CME, mostrando un patrón de expresión opuesto al de los factores de transcripción (FT) fundamentales para la pluripotencia, Nanog, Oct4 y Sox2. En base a esta evidencia, nos proponemos estudiar si HO-1 es regulada por alguno de estos FT. En primer lugar analizamos in silico la región promotora del gen HO-1 y encontramos varios si=os puta=vos de unión para Oct4 y Nanog. Luego, estudiamos la regulación de HO-1 en CME en las que disminuimos los niveles de expresión de estos FT mediante el uso de short hairpin RNA (shRNA). Encontramos que los niveles de ARN mensajero (ARNm) de HO-1, analizados mediante RT-qPCR, aumentaban en CME transfectadas con el shRNA dirigido contra Oct4, respecto a los de las células transfectadas con el shRNA control (shGFP). Luego, estudiamos si HO-1 estaba modulada por Oct4 en un sistema heterólogo donde la expresión de dicho FT es inducida mediante tratamiento con doxiciclina (doxi). Demostramos que la inducción de Oct4 disminuyó la expresión del gen de HO-1, tanto a nivel de ARN mensajero como de proteína, determinado por RT-qPCR, inmunofluorescencia y Western Blot. Nuestros resultados demuestran que el FT Oct4 modula nega=vamente la transcripción del gen HO-1, sugiriendo una relación entre los FT de pluripotencia y el sistema de defensa frente al estrés oxida=vo.