Caracterización de un fragmento proteolítico de anticuerpo que inhibe la internalización del virus Junín

PAYES C, VÁZQUEZ CA, ZIEGENBEIN J, SAWAYA M, CASCIO D, DANIELS-WELLS T, PENICHET M, CORDO SM, RODRIGUEZ J, HELGUERA G

Congreso; Drug Discovery for Neglected Diseases International Congress 2018; 2018

La Fiebre Hemorrágica Argentina (FHA) es una enfermedad grave circunscripta a la región central del país, causada por el mamarenavirus Junín (JUNV). Actualmente se trata con plasma de pacientes convalecientes[1], pero éste puede exhibir variabilidad y riesgo de enfermedades por transfusión[2], por lo que son necesarias nuevas terapias. La entrada de JUNV a las células humanas ocurre vía endocitosis mediante la unión de la glicoproteína viral (GP1) con el receptor de transferrina-1 (hTfR1)[3]. Previamente demostramos que el anticuerpo monoclonal (AcM) ch128.1 se une al hTfR1, inhibiendo la entrada de JUNV a la célula [4]. Sin embargo, ch128.1 tiene isotipo humano IgG3 que puede inducir citotoxicidad [5], por lo que presenta riesgos de dañar tejidos sanos.El objetivo de este trabajo es avanzar en el desarrollo de un nuevo AcM contra las FHA que carezca de dominio Fc y por ende, no induzca actividad inflamatoria. Se obtuvo por digestión con papaína el fragmento Fab del AcM ch128.1 (Fab128.1). Se evaluó la unión del Fab128.1 a sTfR1 por sándwich-ELISA y sobre células HEK-293T por citometría de flujo. El bloqueo de la entrada de JUNV se estudió in vitro con pseudovirus decorados con sus GP1/GP2. El efecto sobre la infección de células A549 se evaluó por ensayo de formación de placas y utilizando una cepa atenuada de JUNV. Se determinó mediante qPCR la abundancia del RNA de la proteína viral Z. También se realizó el análisis estructural del Fab128.1 por cristalografía de rayos-X y el modelado de docking TfR1-Fab128.1 con los servidores Cluspro y Rosetta-Snugdock.Se pudo determinar que al igual que el AcM ch128.1, el Fab128.1 se une a sTfR1 y es capaz de bloquear la entrada del virus JUNV y sus pseudovirus. También, se logró resolver la estructura atómica delFab128.1 con una resolución de 2.9Å. Por docking se obtuvo un modelo del complejo TfR1-Fab128.1 en donde existe un solapamiento de los sitios de unión de Fab128.1 y la GP1 de MACV.Estos estudios confirman que Fab128.1 puede bloquear la entrada del mamarenavirus de FHA in vitro como el AcM completo compitiendo por el sitio de unión de la GP1 viral, y contribuyen al diseño racional de un biofármaco que pueda ser producido a bajo costo, y que constituya una alternativa terapéutica eficaz y segura contra la FHA.