Los factores de transcripción OCT4 y NANOG, esenciales en células madre pluripotentes, regulan la expresión de SOD2

CLAUDIA SOLARI; MARÍA SOLEDAD COSENTINO; SANTIAGO MIRIUKA; MARIA VICTORIA PETRONE; MARCOS GABRIEL FRANCIA; ALEJANDRA GUBERMAN; CAMILA VÁZQUEZ ECHEGARAY; ARIEL WAISMAN; LINO BARAÑAO

Buenos aires

Jornada; Jornadas Interdisciplinarias de Química Biológica 2017; 2017

Los factores de transcripción (FT) Oct4 y Nanog son esenciales en el mantenimiento de las propiedades fundamentales de las células madre pluripotentes, autorrenovación y pluripotencia[1]. Las células madre embrionarias (CME) y las pluripotentes inducidas (CMPI) poseen un complejo sistema de defensa frente al estrés oxidativo, que entre otras funciones, asegura la estabilidad genómica, que es crítica para elrol de estas células en el desarrollo[2], [3]. Bajo la hipótesis que estos FT regulan la expresión de genes involucrados en diversos mecanismos celulares, estudiamos la modulación de la expresión de algunos genes implicados en la defensa frente al estrés oxidativo. En este trabajo analizamos la regulación del gen Sod2 en el estado indiferenciado y durante el proceso de diferenciación, tanto en líneas de CME, R1 y 46C, como en CMPI. Mediante RT-qPCR, observamos una reducción en los niveles de ARNm de Sod2, además de la disminución esperada en la expresión de los FT mencionados. Luego, generamos dos vectores reporteros pSod2.1-Luc y pSod2.2-Luc, mediante el clonado de dos fragmentos que abarcan distintas regiones del promotor de Sod2 río arriba del gen de Luciferasa. Realizamos ensayos de trans-activación en una línea celular de fibroblastos, co-transfectando estas construcciones con vectores de expresión de Oct4 y Nanog. Observamos que la actividad del promotor de Sod2 es inducida por dichos FT en ambas construcciones. Finalmente, en CME redujimos la expresión de Oct4 y Nanog mediante una estrategia de short hairpin RNA. En estas condiciones observamos una disminución en la expresión del gen en estudio. En conclusión, encontramos que los FT esenciales de CMP regulan la expresión de Sod2, un gen fundamental en la defensa frente al estrés oxidativo, evidenciando un rol de estos FT en la preservación de la homeostasis redox en CMP.