IQUIBICEN   23947
INSTITUTO DE QUIMICA BIOLOGICA DE LA FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Generacion de lineas celulares reporteras para estudiar la dinamica de interaccion de OCT4 y SOX2 con la cromatina
Autor/es:
CLAUDIA SOLARI; MARIA VICTORIA PETRONE; RICARDO ALBERIO; MARÍA SOLEDAD COSENTINO; PAULA VERNERI; JESICA CANIZO; ALEJANDRA GUBERMAN; CAMILA VÁZQUEZ ECHEGARAY; CAMILA OSES; MARCOS GABRIEL FRANCIA; VALERIA LEVI
Lugar:
buenos aires
Reunión:
Jornada; Jornadas Interdisciplinarias de Química Biológica 2017; 2017
Institución organizadora:
Departamento de Química Biológica, FCEyN, UBA
Resumen:
Hace aproximadamente diez años se obtuvieron las células madre pluripotentes inducidas (iPSC) mediante reprogramación celular1. Actualmente existen interrogantessobre los mecanismos involucrados en este proceso, más aún considerando que no se han podido obtener CMPI fidedignas en muchas especies animales, incluyendo la especie bovina que presenta un gran interés biotecnológico2. Puntualmente, el remodelado de la cromatina y la expresión de los factores de transcripción (FT) relevantes en células madre, Oct4, Sox2 y Nanog, son elementos clave durante la reprogramación celular. Estos FT, además de controlar la expresión de múltiples genes, se autorregulan y se inducen mutuamente. El objetivo principal de este trabajo es estudiar el proceso de reprogramación celular, utilizando un modelo ampliamente descripto como son las células de ratón. Para este propósito, generamos líneas celulares estables inducibles por doxiciclina (sistema Tet-On), que sobre-expresan los FT Oct4 o Sox2 fusionados en el extremo C-terminal a la proteína fluorescente YPet. Establecimos las líneas mediante transducción con partículas lentivirales, tanto en células diferenciadas (NIH3T3, fibroblastos embrionarios), como en células pluripotentes (W4, células madre embrionarias e iPS17, línea generada en nuestro laboratorio3). Luego aislamos clones únicos seleccionando aquellos de fenotipo normal en ausencia de doxiciclina, según su morfología y estado del ciclo celular. Para caracterizar las líneas obtenidas realizamos curvas de dosis y tiempos de inducción por doxiciclina, estableciendo condiciones óptimas de 2 ug/ul y 48 hsde inducción. Estudiamos la funcionalidad de los transgenes evaluando la expresión de Oct4, Sox2 y Nanog, en presencia o ausencia de doxiciclina, mediante inmunofluorescencia y RT-qPCR. Nos encontramos realizando experimentos de espectroscopia de correlación de fluorescencia (FSC) mediante microscopia confocal, para estudiar la dinámica de interacción de estos FT y la cromatina4, visualizada mediante la expresión de la proteína reportera H2B-RFP. Esperamos que comprender esta dinámica contribuya a optimizar los procesos de reprogramación celular.