IQUIBICEN   23947
INSTITUTO DE QUIMICA BIOLOGICA DE LA FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Characterization of the mTAG system to visualize endogenous mRNAs in vivo during quiescence in Saccharomyces cerevisiae
Autor/es:
SOLARI C; PORTELA P
Reunión:
Workshop; Biología Celular y Molecular del ARN.; 2018
Resumen:
El sistema mTAG consiste en el agregado de secuencias de unión (stem loops) de la proteína viral MS2 a mRNAs de interés y la co-expresión de la proteína de fusión MS2-GFP 3 . Recientemente, el empleo de esta técnica ha sido revisada o cuestionada debido a la acumulación de fragmentos 3´ de degradación del mRNA asociados anormalmente a P-bodies, En este trabajo presentamos el análisis por microscopía y Northern Blot del sistema mTAG para los mRNAs de ENO2, PDC1, MFA2 y TIF1 en células durante fase exponencial, estacionaria y post agregado de nutrientes. Mediante perfiles polisomales analizamos el estado traduccional general de las células. Nuestros resultados indican que la localización de cada mRNA-mTAG responde según la disponibilidad de nutrientes y estado traduccional. La disminución de nutrientes promovió el arresto traduccional y la acumulación de 1-2 gránulos mRNA-mTAG/célula que no co-localizaron con P-bodies o Stress granules. El análisis de integridad de los mRNA-mTAG mostro la acumulación de fragmentos de degradación dependientes de la expresión de MS2-GFP 3 sugiriendo la formación de complejos estables aberrantes 3´mRNA-mTAG. Post reactivación traduccional, aumenta la expresión de los mRNA y cambia el patrón de agregación pero se mantiene la tasa de degradación de los mRNA. La inactivación de PKA redujo la formación de p-bodies y stress granules en fase estacionaria. Afectó la formación de gránulos mRNA-mTAG pero no afecto la acumulación de productos de degradación.