Estudio funcional de la modulación del factor de transcripción AP-1 por proteínas FKBPs

FONTANA V.; ERLEJMAN A.G.; DE LEO S.A.; GALIGNIANA M.D.; CAMISAY M.F.

Buenos Aires

Jornada; Jornadas las Jornadas Interdisciplinarias de Química Biológica; 2017

Departamento de Química Biológica, FCEN-UBA

La proteína activadora 1 (AP-1) es un factor de transcripción que participa en procesos celulares como la proliferación y la respuesta al estrés. AP-1 activa a genes que contienen elementos de respuesta a ésteres de forbol como PMA. Recientemente, demostramos que las inmunofilinas de la subfamilia FKBP (FK506-binding proteins), en particular FKBP51 y FKBP52 regulan la localización subcelular y la actividad transcripcional de receptores esteroidales y del factor de transcripción NF-kB. Dado que AP-1 y NF-kB intervienen en vías de señalización similares, hipotetizamos que las FKBPs podrían regular a AP-1. Estudios de gen reportero mostraron que FKBP52 incrementó la activación de AP-1 en respuesta a PMA (100% de activación) desde un 350+35.5% a un 6972+569% (p<0,001) en células HEK293Ttransfectadas con el plásmido pCI-neo-hFKBP52 (0,5-1,5ug). Por el contrario, FKBP51 la inhibió, también en forma concentración dependiente obteniéndose solo una activación del 30+4% (p<0,001) para la máxima cantidad de plásmido ensayada (pC-neo-hFKBP51: 1,5ug). El efecto de FKBP52 fue revertido por cotransfección con FKBP51. Con el fin de evaluar respuestas endógenas, se estudió la secreción de IL-6 (por ELISA) y la activación de MMP-2 (zimografías) en células BeWo estimuladas con PMA. Nuevamente, FKBP52 aumentó tanto la secreción de IL-6 como la actividad proteolítica de MMP-2 en más de 200% (p<0,003) siendo ambos efectos significativamente inhibidos por FKBP51 (p<0,05). La pre-incubación con FK506, macrólido inhibidor de la actividad PPIasa de las FKBPs, así como la transfección con mutantes puntuales de FKBP52 que carecen de actividad PPIasa (FKBP52F67Y y FKBPP52 F130Y), bloquearon el efecto estimulador de FKBP52. Concluimos que FKBP51 y FKBP52 son capaces de modular al factor AP-1 en forma contrapuesta, y que la acción estimulante de FKBP52 requiere de su actividad de PPIasa. Ambas FKBPs actuarían de manera concordante en respuestas biológicas mediadas por NF-kB y AP-1.Financiamiento: UBA, CONICET and PICT 2015-1603.