Alteración de la estructura de la eritropoyetina por N-homocisteinilación genera cambios en su función

WETZER DIANA; SCHIAPPACASSE AGUSTINA; NESSE ALCIRA; MALTANERI ROMINA EUGENIA; VITTORI DANIELA; CHAMORRO MARÍA EUGENIA

Jornada; Jornadas Interdisciplinarias de Quimica Biologica; 2017

La eritropoyetina (Epo) es una citoquina conocida por sus propiedades hematopoyéticas. A pesar del éxito de la Epo humana recombinante para tratar anemias asociadas a diversas patologías existe un número significativo de pacientes que no responden al tratamiento. Elevados niveles de homocisteina un factor de riesgo de enfermedades cardiovasculares se asociaron con modificaciones en la estructura de proteínas debido a N-homocisteinilización en los residuos de lisinas por la altamente reactiva homocisteinatiolactona (HTL). Nuestro objetivo fue investigar si las funciones eritropoyética y antiapoptótica de la Epo se modificaban luego de la N-homocisteinilación. Epo se incubó con diferentes concentraciones de HTL a 37 ºC por 24 h (EpoHTL), la efectividad del proceso fue evaluada por reacción de Ellman, electroforesis en gel de poliacrilamida y capilar de zona. La acción eritropoyetica de Epo y EpoHTL (ng/mL) se evaluó en cultivos (48 h) de la línea celular UT-7, la cual posee capacidad de difrenciación eritroide, mediante: ensayo de proliferación celular (azul de tripan): Epo 45,2 ± 8,8 x104 células/mL; *EpoHTL 29,6 ± 2,7 x10 4células/ml; *P<0,05, n=8; Ensayo de MTT: Epo 0,892 ± 0,071 O.D.; **EpoHTL 0,502 ± 0,061 O.D.; **P<0,01; n=8. La translocación de la fosfatidilserina se usó para evaluar apoptosis (citometría de flujo, células positivas anexina-V): Epo 21,7± 2,6%; *EpoHTL 46,7 ± 1,5%; *P<0,05; n=4.El análisis de la molécula EpoHTL por medición de fluorescencia intrínseca, fluorescencia del ANS, dicroísmocircular y dispersión dinámica de luz mostró un cambio conformacional de alpha hélice a lámina betay cambios estructurales compatibles con la formación de oligómeros solubles. Los resultados de la disminución en las acciones eritropoyetica y antiapoptotica de la EpoHTL sugieren una posible nueva forma de resistencia a la Epo, especialmente importante para pacientes con síndrome cardio-renal.