Efecto de distintas condiciones de cultivo sobre la producción de pioverdinas en Pseudomonas extremaustralis

JOSÉ G. IBARRA ; NANCY I. LÓPEZ

Rosario

Congreso; ALAM-SAMIGE; 2017

El hierro es un nutriente fundamental para la mayoría de los microorganismos. En condiciones en las que es limitante para su crecimiento, muchas bacterias producen y liberan compuestos con alta afinidad por este llamados sideróforos. Las Pseudomonas producen gran variedad de compuestos con estas características, uno de los más abundantes son las pioverdinas (PVD) que están formadas por una porción peptídica y una porción dihidroxiquinolina con propiedades de cromóforo. Las PVD han sido ampliamente estudiadas en P. aeruginosa PAO1 en relación a la patogenicidad y en P. protegens Pf5 y P. fluorescens SBW25 por su papel en la protección contra patógenos vegetales. El objetivo de este trabajo fue estudiar la producción de PVD en distintas condiciones de cultivo en P. extremaustralis, una bacteria procedente de la Antártida que posee características de interés como potencial promotora del crecimiento vegetal tales como alta resistencia a estrés hídrico y frío, solubilización de fosfato y adherencia a raíces.Los genes involucrados en la síntesis, regulación y transporte de PVD se identificaron realizando análisis comparativos de P. extremaustralis con P. protegens Pf5 utilizando herramientas bioinformáticas (RAST, PRODORIC, BLAST y Metacyc). La producción de PVD se cuantificó por espectrofotometría en cultivos en medio líquido King B a 8 y 28°C y en aerobiosis y microaerobiosis en las 2 especies mencionadas y en una mutante del regulador ANR, involucrado en la transición de aerobiosis a anaerobiosis, en P. extremaustralis. Se midió la fluorescencia del sobrenadante y se relativizó a la densidad óptica del cultivo (F520nm/DO600nm). Se identificaron 26 genes relacionados con la biosíntesis de PVD en P. extremaustralis, organizados en 3 grupos, que mostraron diferentes valores de similitud proteica con P. protegens Pf5 (46% de identidad en péptido-sintetasas no-ribosomales a 93% de identidad en PvdS). La organización genética fue muy similar. No se observaron duplicaciones génicas y los genes regulatorios no parecen diferir de los de otras Pseudomonas. P. extremaustralis y P. protegens Pf5 mostraron valores similares de producción de PVD, luego de 72h de cultivo a 8ºC (6061 ±1800 y 5570 ±1623 de F/DO, respectivamente; P>0,05, t de Student). En aerobiosis a 28ºC se obtuvieron valores de 1400 ± 144 para P. extremaustralis, de 2300 ± 190 para la mutante anr y de 2145 ± 214 para P. protegens Pf5 a las 24 h. En microaerobiosis luego de 48 h de cultivo, la producción de PVD fue significativamente mayor para la cepa mutante anr (P