Advances in the development of an in vitro test for detection of tuberculosis infection

MARÍA PAULA MORELLI; JOAQUIN M. PELLEGRINI; EDUARDO H. CHULUYAN; DOMINGO PALMERO; FLORENCIA CASTELLO; AGUSTÍN ROLANDELLI; JUAN L. IOVANNA; NICOLÁS O. AMIANO; NANCY TATEOSIAN; VERÓNICA E. GARCIA; RODRIGO HERNANDEZ DEL PINO; ALBERTO LEVI

Mar del Plata

Congreso; LXI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2016

SAIC-SAI-SAFE

Los ensayos de liberación de IFN-γ (IGRAs) son mejores indicadores de la infección por Mycobacterium tuberculosis (Mtb) que el test de tuberculina (TST) en poblaciones vacunadas con BCG. Pero Sin embargo los IGRAs no discriminan infección latente de activa y no existe un ?gold standard? para diagnóstico de infección latente (LTBI). Como se requieren ensayos mejorados para diagnosticar la infección por Mtb estudiamos la eficacia de varios antígenos de latencia de Mtb en dadores sanos vacunados con BCG (DS), pacientes con tuberculosis (TB) y LTBI (diagnosticados con el QuantiFERON-TB Gold In-Tube y TST). Al analizar la producción de IFN-γ contra los diversos antígenos en células mononucleares de sangre perifércia (CMSP), los sujetos LTBI secretaron significativamente tivos mayores cantidades de IFN-γ contra el antígeno Rv2626c que los DS y los TB. Además, se identificaron pooles de péptidos de Rv2626c a los cuales sólo los LTBI respondieron. La estimulación de sangre entera con Rv2626c permitió la discriminación entre infección latente y activa. A fin de diseñar nuevos pooles, estimulamos CMSP de LTBI con los péptidos que abarcan la secuencia completa de Rv2626c. Los péptidos 1, 2, 3, 5, 12, 22, 23, 30 y 36 resultaron ser los más inmunogénicos. Con diferentes combinaciones de éstos generamos los pooles , BD, IM1, IM2, IM3 y CMSP de y los tres grupos en estudio fueron estimulados con ellos. Estos pooles diferenciaron significativamente a los LTBI tanto de pacientes TB como de DS. En sangre entera el pool IM2 diferenció claramente individuos LTBI de DS y TB demostrando que los nuevos pooles derivados de Rv2626c son inmunogénicos al ser utilizados en tubos de poliestireno similares a los del QFT. Así, los pooles compuestos por menos de seis péptidos derivados de Rv2626c son fuertemente inmunogénicos, permitiendo reducir costos en la manufactura de un nuevo kit para detectar infeccion por Mtb para mejorar el diagnóstico de LTBI, aún en indivudos vacunados con BCG.