Evaluación del efecto del glifosato in vitro sobre la actividad de acetilcolinesterasa (AChE) de dos especies de peces de agua dulce

BERNAL-REY, D.; MENENDEZ HELMAN R. J.; DOS SANTOS AFONSO, M.

Cordoba

Congreso; VI Congreso Argentino de la Sociedad de Toxicologia y Quimica Ambiental (SETAC); 2016

SETAC Argentina

En Argentina, con la expansión de la frontera agrícola tuvo lugar un aumento en la aplicación de plaguicidas. En particular, el glifosato [N- (fosfonometil) glicina; PMG] es el principal herbicida de amplio espectro utilizado en la región. La aplicación de las formulaciones de glifosato utilizadas en Argentina aumentaron de 70 mil toneladas a más de 180 mil toneladas entre 1999 y 2013 (CASAFE, 2014). En estudios previos se ha determinado la inhibición de la acetilcolinesterasa (AChE, biomarcador de neurotoxicidad) en peces de agua dulce expuestos a formulados de glifosato como también al principio activo (Glusczak et al., 2007; Menéndez-Helman et al., 2012). La AChE ha sido ampliamente utilizada como biomarcador de exposiciones a organofosforados (del grupo fosfato) y carbamatos ya que los mismos producen una inhibición directa. Dado que el PMG es un organofosforado del grupo fosfonatos se desconoce si el mecanismo de la inhibición es o no directo. En el presente trabajo se evaluó el efecto de la exposición a PMG in vitro sobre la actividad de la acetilcolinesterasa en dos especies no-blanco de peces de agua dulce (Gambusia affinis y Cnesterodon decemmaculatus). Para ello se co-incubaron homogenatos de animales no expuestos con soluciones de PMG durante 3 h; se añadieron diferentes cantidades de solución madre de PMG (50mM en buffer fosfato, ajustado a pH=8) a alícuotas de 45μL de homogenato de la sección anterior de los animales. En todos los casos se alcanzó un volumen final de 75μL por adición de buffer fosfato, obteniéndose las siguientes concentraciones de PMG: 0, 2,5; 5; 7,5; 10 y 20 mM. La actividad de AChE se midió según el método de Ellman. La valores promedio (actividad de AChE por mg de peso húmedo) para los controles fueron 16 ± 2 para G. affinis y 21 ± 5 para C. decemmaculatus. No se observó inhibición de la actividad de AChE para ninguna de las concentraciones ensayadas (rango de actividad obtenido: 98 - 103% respecto a los controles, p > 0,05). Recientemente algunos trabajos han reportado la existencia de una inhibición directa de AChE por PMG. Sin embargo, no podría descartarse que el efecto descripto esté causado por un cambio de pH ya que el glifosato tiene un comportamiento ácido/base que no puede despreciarse a altas concentraciones como las ensayadas en estos casos. En el presente trabajo hemos realizado procedimientos para regular el pH de forma de distinguir un efecto de la molécula más allá de su característica ácida.