AR-12 inhibe múltiples chaperonas previniendo de la replicación in vitro de los virus Junín y dengue. Exposicion oral

GARCÍA CC; SEPÚLVEDA CS; DAMONTE EB; GIOVANNONI F

Jornada; XXXVI Reunion Cientifica Anual Sociedad Argentina de Virologia; 2016

Recientemente se ha demostrado que el compuesto OSU-03012 (AR-12) reduce la función y actividad ATPasa de múltiples integrantes de las familias de chaperonas HSP90 y HSP70.Es sabido que estas proteínas juegan roles esenciales en el mantenimiento de la estabilidad proteica y la señalización celular y también algunas de ellas, como HSP90, han sido evaluadas como blanco para el desarrollo de drogas terapéuticas de diseño y en el estudio de la biología de células tumorales. En el campo de la virología, han sido descriptos roles fundamentales de HSPA5/GRP78/BiP en el ciclo de replicación de DNA y RNA virus.En este trabajo se estudió la importancia de un grupo de proteínas chaperonas sobre la replicación del virus Junín (JUNV), arenavirus agente etiológico de la fiebre hemorrágica argentina (FHA), y del flavivirus dengue (DENV).Se evaluó el efecto antiviral in vitro del compuesto AR-12 en infecciones con distintas cepas de JUNV y distintos serotipos de DENV en las líneas celulares humana A549 y de mono Vero. AR-12 fue siempre más eficaz contra JUNV y DENV que la ribavirina (RIB), el fármaco antiviral de referencia para el tratamiento de las infecciones causadas por estos virus, estando los índices de selectividad (IS) de AR-12 en el rango de 118-51 para JUNV y 130-30 para DENV, de acuerdo a la cepa o al serotipo estudiado (IS de RIB para JUNV = 17; IS de RIB para DENV = 13). Para determinar cual de todas las chaperonas afectadas por AR-12 mencionadas anteriormente están involucradas en la inhibición del ciclo de replicación de JUNV, se realizaron ensayos de silenciamiento génico de distintas chaperonas. El silenciamiento individual de HSP90 redujo significativamente la replicación de JUNV a las 24 h p.i., mientras que el silenciamiento de GRP78 y HSP70 también produjo inhibición de la replicación pero a un nivel menor. La respuesta inhibitoria fue similar a las 72 h p.i. Se ensayó también la combinación de los tres siRNAs más eficaces, sólo el silenciamiento simultáneo de HSP90 y HSP70 resultó en mayor reducción de la infectividad del virus. Los resultados de infectividad de JUNV con respecto al silenciamiento de las chaperonas se confirmaron mediante inmunofluorescencia de la NP viral en las células infectadas y transfectadas con los siRNA.