LA EXPRESIÓN DE SOD2 ES REGULADA POR OCT4 Y NANOG, FACTORES DE TRANSCRIPCION ESENCIALES EN CÉLULAS MADRE PLURIPOTENTES

CLAUDIA SOLARI; MARÍA VICTORIA PETRONE; CAMILA VAZQUEZ ECHEGARAY; MARÍA SOLEDAD COSENTINO; ARIEL WAISMAN; MARCOS FRANCIA; EMILY VILLODRE; GUIDO LENZ; SANTIAGO MIRIUKA; LINO BARAÑAO; ALEJANDRA GUBERMAN

Mar del Plata

Congreso; LX Congreso de la Sociedad Argentina de Investigaciones Clínicas; 2015

Sociedad Argentina de Investigaciones Clínicas

Los factores de transcripción (FT) Oct4, Sox2 y Nanog sonesenciales en el mantenimiento de las propiedades funciona-les de las células madre pluripotentes (CMP), autorrenovacióny pluripotencia. Las células madre embrionarias (CME) y laspluripotentes inducidas (CMPI) poseen un complejo sistema dedefensa frente al estrés oxidativo, que entre otras funciones,asegura la estabilidad genómica, que es crítica para su rol en eldesarrollo. Bajo la hipótesis de que estos FT regulan la expresiónde genes involucrados en diversos mecanismos celulares, comolos implicados en la defensa frente al estrés oxidativo, estudiamosla modulación de la expresión de algunos de estos genes enel estado indiferenciado y en la diferenciación. En este trabajoanalizamos en particular la regulación del gen Sod2. MedianteRT-qPCR, previamente observamos que su expresión disminu-yó a lo largo de distintos protocolos de diferenciación, tanto enlíneas de CME, Ainv15 y R1, como en CMPI. Asimismo, los FTtambién redujeron su expresión. Luego, generamos dos vectoresreporteros pSod2.1-Luc y pSod2.2-Luc, mediante el clonado dedos fragmentos que abarcan distintas regiones del promotor deSod2, río arriba del gen de Luciferasa. Realizamos ensayos detrans-activación en una línea celular de fibroblastos, cotransfec-tando estas construcciones con vectores de expresión de Oct4y Nanog, y observamos que la actividad del promotor de Sod2es inducida por dichos FT en ambas construcciones. Finalmente,analizamos mediante RT-qPCR la modulación de la expresiónde Sod2 en CME R1 que fueron transfectadas con vectores quecodifican para short hairpin RNA dirigidos contra Oct4 y Nanog.Encontramos una disminución en la expresión del gen en estudio enlas condiciones de reducción de mRNA de estos FT. Creemos queun mayor entendimiento de esta regulación contribuirá a la compren-sión de los mecanismos moleculares relevantes en el mantenimientode las propiedades fundamentales y la integridad de su genoma.