Los factores de transcripción fundamentales en células madre pluripotentes modulan la actividad del promotor del gen de la metiltransferasa de argininas Prmt8

CAMILA VAZQUEZ ECHEGARAY; CLAUDIA SOLARI; MARÍA SOLEDAD COSENTINO; MARÍA VICTORIA PETRONE; MARCOS FRANCIA; ARIEL WAISMAN; JESICA CANIZO; EMILY VILLODRE; GUIDO LENZ; SANTIAGO MIRIUKA; LINO BARAÑAO; ALEJANDRA GUBERMAN

Mar del Plata

Congreso; LX Congreso de la Sociedad Argentina de Investigaciones Clínicas; 2015

Sociedad Argentina de Investigaciones Clínicas

Las modificaciones post-traduccionales de los residuos dehistonas llevadas a cabo por remodeladores de la cromatina sonparte fundamental de la regulación epigenética celular. Un tipo demodificación es la adición de grupos metilo a los residuos arginina,mediada por la familia de enzimas metiltransferasas de argininas(PRMT), cuyo principal miembro es PRMT1, fundamental en eldesarrollo. Su parálogo PRMT8 se encuentra poco estudiado yse ha reportado su expresión únicamente en neuronas adultas yneurogénesis. Sin embargo, previamente encontramos que estegen se expresa en células madre pluripotentes (CMP) y que sereprime durante la diferenciación. Bajo la hipótesis que este genpodría ser regulado por los factores de transcripción (FT) funda-mentales en CMP, Oct4, Sox2 y Nanog, nos propusimos estudiarsu regulación. Para ello construimos un vector reportero medianteel clonado de una región del promotor de Prmt8, abarcando unsitio putativo de unión para Nanog y uno de complejos formadospor FT presentes en CMP, río arriba de la secuencia codificantepara la proteína luciferasa. Utilizamos el plásmido obtenido,pPrmt8-Luc, en ensayos de trans-activación en la línea celularNIH 3T3, en la cual no detectamos expresión de los factores Oct4,Sox2 y Nanog. Mediante co-transfección con distintas cantidadesde vectores de expresión para dichos FT, encontramos que laactividad luciferasa fue inducida fuertemente de manera dosis-dependiente por Nanog, y en menor medida por Oct4 y Sox2.Esto indica que estos FT modulan positivamente dicha regiónpromotora. Para profundizar este análisis estamos estudiando laregulación de este gen en su contexto endógeno, mediante RT-qPCR, tanto silenciando los mencionados FT mediante la estra-tegia de short hairpin ARN en CMP, como sobreexpresando losmismos en NIH 3T3. Esperamos que estos resultados contribuyana la comprensión de los mecanismos moleculares relevantes parael mantenimiento de las propiedades fundamentales de CMP.