Evaluación del rol de la integrina alfa 5 durante la reprogramaci¨®n

GABRIEL NEIMAN; FERNANDA MESQUITA; XIMENA GARATE; LUCIA MORO; CARLOS LUZZANI; LEONARDO ROMORINI; GUSTAVO SEVLEVER; ALEJANDRA GUBERMAN; SANTIAGO MIRIUKA

Mar del Plata

Congreso; LX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2015

SAIC

Las celulas madre pluripotentes inducidas (CMPI) se obtienen a travesde la generacion de celulas madre a partir de celulas somaticasadultas. Existen cuatro factores que producen celulas con morfologiay funcionalidad similares a celulas madre embrionarias a partir de laactivacion de genes asociados a pluripotencia y a la represion degenes de la diferenciacion. Existe interes creciente en estudiar el rolde la matrix extracelular (MEx) tanto en las CMPI como en sureprogramacion. La MEx es una compleja red que no solo funcionacomo sosten de las celulas, sino que presenta funciones desenalizacion a traves de receptores de membrana llamados integrinasque interaccionan principalmente con proteinas estructurales de MExcomo Fibronectina (FN). Nuestro objetivo consiste en averiguar el rolde la integrina ¦Á5 en la reprogramacion de fibroblastos humanos (HFFFM) y cuya interaccion se da con FN. Desarrollamos una linea celularestable inducible de fibroblastos humanos HFF FM que al tratarla condoxyciclina, disminuye la expresion de ¦Á5. Por qRT-PCR, observamosuna disminucion de la expresion de esta integrina en un 75%, lo quetambien fue verificado por citometria. Al evaluar la proliferacion de losHFF FM ¦Á5, obtuvimos una disminucion de esta en un40%. Resultados preliminares del silenciamiento de ¦Á5 medianteedicion genica a traves del sistema CrispR-Cas9 muestra tambien unadisminucion de la proliferacion. Por citometria evaluamos la eficienciade reprogramacion en fibroblastos humanos wt y ¦Á5 a partir de lainfeccion viral con el plasmido STEMCCA. Mantuvimos a lo largo detres semanas la integrina ¦Á5 silenciada y evaluamos el grado dereprogramacion mediante la medicion de dos marcadores depluripotencia, SSEA-4 y TRA 1-60. Obtuvimos una caida significativaen la expresion de estos marcadores. Concluimos que silenciando laintegrina ¦Á5, se afecta la proliferacion de los fibroblastos y porconsiguiente la potencialidad de fibroblastos para ser reprogramados.