Efecto de homocisteina-tiolactona en cultivos de células endoteliales

CHAMORRO, ME; MALTANERI, R; SCHIAPPACASSE, A; QUINTANA, I; GENOUD, V; VITTORI, D; NESSE, A

Congreso; LX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2015

La hiperhomocisteinemia (HHcy) ha sido asociada a la disfunción e injuria endotelial involucrada en el desarrollo de trombosis y ateroesclerosis. Recientemente, se ha propuesto que la homocisteína-tiolactona (HTL), especie altamente reactiva, sería responsable de la acción perjudicial de la HHcy. La reacción de N-homocisteinilación ocurre cuando HTL acila los residuos lisina de las proteínas. La presencia de suero en el cultivo de células endoteliales permite su crecimiento, migración y desarrollo. El objetivo de este trabajo es estudiar el efecto de suero tratado con HTL en la migración de la línea endotelial EA.hy926. Suero fetal bovino fue incubado en presencia de HTL (concentraciones finales 2 y 4 mM) durante 18 h, a 37 °C (SFB-HTL). Control: SFB incubado con PBS. Por electroforesis capilar y electroforesis en gel de poliacrilamida en condiciones nativas se observaron cambios en el patrón de bandas proteicas y, en particular, modificación de la movilidad electroforética de la albúmina. La disminución de la carga neta negativa de las proteínas corrobora el bloqueo de residuos lisina por la reacción de N-homocisteinilación.Se estudió la acción del SFB N-homocisteinilado sobre la migración celular mediante la prueba de scratching con la cuantificación de la migración por el ancho de la herida y sobre la proliferación celular por el ensayo de MTT. En presencia del SFB-HTL la migración celular disminuyó en comparación con los cultivos con SFB, en forma dependiente de la concentración de HTL. La proliferación celular no fue alterada por la presencia del SFB-HTL. La N-homocisteinilación de las proteínas del suero altera su efecto promigratorio sobre las células endoteliales frente a una injuria, sugiriendo un posible mecanismo de acción antiangiogénica.