LA PROTEÍNA DE LA LEUCEMIA PROMIELOCÍTICA ES UN FACTOR DE RESTRICCIÓN CONTRA EL VIRUS DENGUE

GIOVANNONI, F.; DAMONTE, E.B.; GARCÍA, C. C.

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología; 2015

La inmunidad intrínseca está basada en factores celulares de restricción que son expresados de manera constitutiva, estableciendo así, un mecanismo de defensa inmediato frente a infecciones virales. La proteína de la leucemia promielocítica (PML, también llamada TRIM19) es un factor de restricción que también puede ser inducido por interferón (IFN). PML interactúa con más de cien proteínas celulares, formando estructuras nucleares discretas conocidas como Nuclear Bodies (NBs). En múltiples familias de virus se han identificado proteínas capaces de interaccionar con PML y, por lo tanto, afectar a los PML-NBs como una estrategia para evadir la respuesta celular antiviral. Dada la ausencia de agentes antivirales y vacunas efectivas contra el virus dengue (DENV), resulta de gran importancia conocer aquellos factores involucrados en la respuesta celular antiviral para ser tenidos en cuenta en posibles desarrollos de agentes farmacológicos. En nuestro trabajo, se propuso investigar la actividad de PML frente al serotipo 2 de DENV (DENV-2) en la línea celular humana A549. El silenciamiento de PML por medio de siRNAs causó un aumento de 0,76 log en la producción de partículas virales a las 24 h post infección (p.i). Análogamente, su sobreexpresión causó una disminución de 1,6 log. Estos resultados fueron corroborados por cuantificación de la expresión de antígeno viral a través de inmunofluorescencia. Posteriormente, se evaluó el efecto de la infección con DENV-2 sobre el patrón nuclear de los PML-NBs al ser visualizados por inmunofluorescencia. Las imágenes revelaron una disminución del número de PML-NBs por núcleo observados a tiempos tardíos p.i. Estos resultados sugieren que la infección con DENV-2 altera a los PML-NBs. Por otro lado, células vecinas a las infectadas mostraron un aumento significativo en el número y tamaño de PML-NBs encontrados por célula. Para estudiar en mayor detalle si este fenómeno estaba relacionado con la liberación de IFN por parte de células infectadas, se cuantificó por RT-PCR en tiempo real el nivel de expresión de genes involucrados en su vía de señalización. Estos ensayos revelaron un aumento significativo en la expresión relativa de IL-6 e IFN-β, entre otros. En particular, la expresión relativa de PML aumentó hasta 5000 veces ante la infección con DENV-2. Interesantemente, estos efectos se vieron disminuidos en células A549 tratadas con un inhibidor de la vía JAK/STAT y en células Vero (deficientes para la producción de IFN). Esto demuestra que la actividad antiviral intrínseca de PML es independiente de IFN, aunque su efecto es potenciado por esta molécula. En resumen, nuestro trabajo constituye la primera evidencia de la contribución de PML a la respuesta antiviral celular contra DENV-2. Serán necesarios otros estudios para determinar el mecanismo molecular detrás de esta actividad.