Actividad antiviral de alcaloides frente al virus dengue.

QUINTANA, V.M.; BRUNETTI, J.E.; PONCE, M.A.; DAMONTE, E.B.; CASTILLA, V.

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología; 2015

El desarrollo de agentes antivirales para hacer frente a la infección por virus dengue (DENV) resulta prioritario dado que hasta el momento no se dispone de vacunas ni antivirales específicos para este virus. En trabajos previos hemos reportado la actividad antiviral de alcaloides como las beta-carbolinas, naturales y sintéticas, frente a DENV. Asimismo, se ha descripto que el alcaloide anisomicina presenta actividad antimicrobiana y modula vías de señalización celular implicadas en la replicación de DENV. El objetivo de este trabajo fue analizar el modo de acción antiviral de la beta-carbolina 9Nmetilharmina, obtenida por síntesis química, y de la anisomicina frente a DENV-2 en cultivos de células Vero. La actividad citotóxica de los compuestos se evaluó por el método de MTS y la actividad antiviral mediante ensayos de inhibición de rendimiento viral. A partir de estos ensayos, se calculó el índice de selectividad para cada compuesto obteniéndose valores de 56,2 y 171,8 para 9N-metilharmina y anisomicina, respectivamente. A las máximas concentraciones ensayadas, 9N-metilharmina y anisomicina provocaron una inhibición del rendimiento viral, medido a las 48 h post-infección (p.i.), del 90% y 99,9%, respectivamente. Además, se demostró la capacidad inhibitoria de los compuestos sobre la cantidad de células que expresaban proteína viral a las 48 h p.i. mediante ensayos de inmunofluorescencia. Para ambos compuestos, el tratamiento de las células en forma previa a la infección no afectó la multiplicación viral. En el caso de la 9N-metilharmina su actividad antiviral resultó independiente de la multiplicidad de infección utilizada y la presencia de este compuesto durante el periodo de adsorción-internalización viral no provocó alteraciones en la producción de virus. Asimismo, se comprobó que la síntesis de RNA viral, analizada por Q-PCR a las 6 y 24 h p.i., no se vio afectada por el tratamiento con 9N-metilharmina. Se realizó también un ensayo de adición de compuesto a distintos tiempos y a las 24 h p.i. se observó que el título de virus asociado a células no Libro de resúmenes 131 presentaba diferencias con el control sin tratar, mientras que sí se detectó una reducción significativa (90%) del título de virus liberado al medio extracelular aun en aquellos cultivos en los cuales el compuesto se agregó en forma tardía (8 h p.i.). Por el contrario, en el caso de la anisomicina, el agregado del compuesto hasta las 8 h p.i provocó una reducción significativa tanto del título de virus asociado a células como del virus extracelular. En conclusión, 9N-metilharmina inhibe la liberación de las partículas virales infecciosas al medio extracelular, afectando la propagación de la infección. Por su parte, la anisomicina resultó ser un inhibidor más potente y selectivo frente a DENV-2 que el compuesto 9N-metilharmina y a diferencia de este último, la anisomicina bloquearía alguna etapa tardía del ciclo de multiplicación evitando la formación de las partículas virales infecciosas.