LA EXPRESIÓN DE SOD2 ES REGULADA POR OCT4 Y NANOG, FACTORES DE TRANSCRIPCION ESENCIALES EN CÉLULAS MADRE PLURIPOTENTES

SOLARI C; PETRONE MV; VAZQUEZ ECHEGARAY C; COSENTINO S; WAISMAN A; FRANCIA M; VILLODRE E; LENZ G; MIRIUKA S; BARAÑAO L; GUBERMAN A

Congreso; reunion anual de la SAIC 2015; 2015

Los factores de transcripción (FT) Oct4, Sox2 y Nanog son esencialesen el mantenimiento de las propiedades funcionales de las célulasmadre pluripotentes (CMP), autorrenovación y pluripotencia. Lascélulas madre embrionarias (CME) y las pluripotentes inducidas(CMPI) poseen un complejo sistema de defensa frente al estrésoxidativo, que entre otras funciones, asegura la estabilidad genómica,que es crítica para su rol en el desarrollo. Bajo la hipótesis de queestos FT regulan la expresión de genes involucrados en diversosmecanismos celulares, como los implicados en la defensa frente alestrés oxidativo, estudiamos la modulación de la expresión de algunosde estos genes en el estado indiferenciado y en la diferenciación. Eneste trabajo analizamos en particular la regulación del gen Sod2.Mediante RT-qPCR, previamente observamos que su expresióndisminuyó a lo largo de distintos protocolos de diferenciación, tanto enlíneas de CME, Ainv15 y R1, como en CMPI. Asimismo, los FTtambién redujeron su expresión. Luego, generamos dos vectoresreporteros pSod2.1-Luc y pSod2.2-Luc, mediante el clonado de dosfragmentos que abarcan distintas regiones del promotor de Sod2, ríoarriba del gen de Luciferasa. Realizamos ensayos de trans-activaciónen una línea celular de fibroblastos, cotransfectando estasconstrucciones con vectores de expresión de Oct4 y Nanog, yobservamos que la actividad del promotor de Sod2 es inducida pordichos FT en ambas construcciones. Finalmente, analizamosmediante RT-qPCR la modulación de la expresión de Sod2 en CMER1 que fueron transfectadas con vectores que codifican para shorthairpin RNA dirigidos contra Oct4 y Nanog. Encontramos unadisminución en la expresión del gen en estudio en las condiciones dereducción de mRNA de estos FT. Creemos que un mayorentendimiento de esta regulación contribuirá a la comprensión de losmecanismos moleculares relevantes en el mantenimiento de laspropiedades fundamentales y la integridad de su genoma.