Entrada del virus Junín dependiente de la lectina DC-SIGN

FORLENZA MARÍA BELÉN; ROLDÁN JULIETA; MARTINEZ MARIA GUADALUPE; CORDO SANDRA; CANDURRA, NÉLIDA A

CABA

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología; 2015

Sociedad Argentina de Virología

La entrada de los virus y su diseminación puede ser mediada por lectinas de tipo c (calcio dependientes) como DC-SIGN, miembro de una familia de receptores que reconoce estructuras de carbohidratos presentes en patógenos. En trabajos previos proporcionamos evidencias de que hDC-SIGN reconoce e internaliza arenavirus del nuevo mundo, Junín (JUNV), agente etiológico de la fiebre hemorrágica argentina, que presenta proteínas altamente glicosiladas en su envoltura. En este trabajo nos proponemos proporcionar más evidencia de la especificidad de la interacción y caracterizar las primeras etapas de la entrada mediada por DC-SIGN. Para mostrar esto, infectamos cultivos NHI3T3 y NIH3T3-HDC-SIGN en presencia de EGTA. En ambos tratamientos se observó la inhibición de la multiplicación sólo en cultivos que expresan la lectina humana. Para analizar los componentes moleculares de la lectina implicada en la internalización de virus, las células NIH3T3 se transfectaron con plásmidos de expresión que codifican para construcciones salvaje o mutantes de motivos citoplasmáticos conservados de la lectina: dileucine (LL), y el grupo triacídico (EEE) que se cree que regulan la unión y tráfico intracelular respectivamente. Nuestros resultados mostraron que la presencia de las mutaciones LL y EEE interfiere con el aumento de infección. Con el propósito de adquirir conocimientos sobre la forma de entrada utilizado después lectina la interacción virus-, utilizamos compuestos que bloquean específicamente diferentes vías de entrada. Nuestros resultados mostraron inhibición significativa de la infección con dynasore (DYN); que inhibe la endocitosisdependiente de dinamina II, clorpromazina (CZ), que inhibe la endocitosis dependiente clatrina, y metil-B-ciclodextrina (MBCD) que inhibe la endocitosis dependiente colesterol. Para determinar las moléculas celulares implicados, las células fueron transfectadas transitoria con plásmidos que codifican proteínas dominante negativas implicados en la entrada. Nuestros resultados mostraron que la infección JUNV depende EPS15 y Dinamina-2, ambos implicados en la endocitosis mediada por clatrina. Como muchas de las vías de entrada dependen del citoesqueleto celular, se estudió el rol de los microfilamentos y microtúbulos durante la infección temprana del virus. Sólo obtuvimos inhibición de la infección en los tratamientos con LatruculinA, un compuesto que interrumpe microfilamentos cortical y citoplasmática mientras que Citochalasin D, que sólo afecta a los microfilamentos citoplasmáticas no mostraron efecto inhibidor sobre JUNV multiplicación. En contraste, los fármacos que alteran los microtúbulos no mostraron afectar JUNV multiplicación. En conclusión, nuestros resultados demuestran que JUNV interactúa específicamente con hDC-SIGN y que la vía de entrada preferencial es la endocitosis dependiente de vesículas recubiertas por clatrina y de la integridad de los filamentos de actina corticales.