Polímero catiónico propicia el ingreso de Vancomicina a Pseudomonasaeruginosa y contribuye a su eficacia

ALOVERO, FABIANA L.; CORTI, MELISA BELÉN

La Falda (Còrdoba)

Congreso; 5ª Congreso Argentino de Microscopia- SAMIC 2018; 2018

Asociación Argentina de Microscopia

Diversos polímeros y otros compuestos policatiónicos interactúan con envolturas celulares modificando su estructura y/o tornándolas permeables a solutos que normalmente no pueden ingresar a la célula, exhibiendo en muchos casos acción antimicrobiana. Esta situación adquiere relevancia en Pseudomonas aeruginosa, en la cual la membrana externa de la pared es responsable de la resistencia intrínseca a detergentes y a antimicrobianos (ATM). El desarrollo de sistemas poliméricos portadores de ATM es una herramienta de utilidad para optimizar la eficacia de fármacos afectada por el desarrollo de resistencia y/o espectros de acción acotados.Eudragit E100 (EuE) es un polímero catiónico a base de dimetilaminoetil metacrilato y otros ésteres neutros de ácido metacrílico usado en el ámbito farmacéutico. En estudios previos se obtuvieron dispersiones de EuE cargadas con Ciprofloxacino y Ofloxacino y se demostró que EuE causa alteraciones en las envolturas bacterianas que incrementan la acción bactericida de ambos fármacos frente a bacterias resistentes, aunque EuE no es bactericida por si solo (1,2). Vancomicina (VAN) es un glicopèptido de espectro reducido que inhibe la síntesis de peptidoglicano, siendo activo sólo frente a cocos Gram positivos. Considerando el elevado tamaño de la molécula de VAN y la estructura de pared característica de P.aeruginosa, este microorganismo está fuera de su espectro de acción. No obstante, estudios de nuestro laboratorio demuestran que dispersiones de EuE en las que se que vehiculiza Vancomicina (EuE-VAN) exhiben acción bactericida frente a P.aeruginosa (3,4). El objetivo de este trabajo fue determinar si la exposición de P.aeruginosa a dispersiones del polímero catiònico vehiculizando VAN (EuE-VAN) contribuye al ingreso del ATM a la célula bacteriana, mediante el uso del ATM marcado (BODIPY FL-VAN ) y posterior análisis por microscopía de fluorescencia. Un cultivo fresco del aislamiento clìnico de P.aeruginosa (Pa FQ-R1, densidad bacteriana estandarizado a 1x108 UFC mL-1) se incubó en presencia de VAN en EuE-VAN o solución libre (concentración de VAN de 1000 μg mL-1 y de EuE 250 μg mL-1). BODIPY FL-VAN se usó como sonda fluorescente a una concentración de 0,1 μg mL-1. Luego de 1 h de incubación a 37ªC con agitación, se extrajeron alícuotas de 500 µL y se centrifugaron 5 min a 6000 rpm. Las muestras montadas entre portaobjetos y cubreobjetos, se sellaron y se observaron en un microscopio Confocal-Olympus FV1200 (Λ exc: 480-500 nm, Λ em: 509-547 nm). En las figuras 1 A-E se muestran las imágenes de fluorescencia (paneles superiores) y de transmisión (paneles inferiores) de los diversos tratamientos comparados. Sólo se observa fluorescencia en células tratadas con VAN vehiculizada en dispersiones de EuE (EuE-BODIPY FL-VAN, panel E superior). La Microscopia de fluorescencia resulto ser una herramienta de utilidad para demostrar la llegada del ATM al sitio de acción descripto a nivel de síntesis de peptidoglicano, situación que se generaría por las alteraciones que produce EuE a nivel de envolturas bacterianas de P.aeruginosa, según lo demostrado en estudios previos. Esto explicaría la eficacia bactericida exhibida por EuE-VAN frente a P.aeruginosa. Este sistema polimérico portador de VAN exhibe un espectro de acción ampliado a bacterias usualmente fuera de su espectro de acción y constituye un sistema de interés para continuar su desarrollo a fin de diseñar formulaciones para vía tópica. Bibliografìa1. Romero V., Pons, P., Bocco, JL., Manzo RH., AloveroFL.Eudragit E100® potentiates the bactericidal action of ofloxacin against fluoroquinolone-resistant Pseudomonas aeruginosa. FEMS MICROBIOLOGY LETTERS. 2012; 334 (2): 102-1102. Romero V, Rosset C, Manzo R,Alovero F. Ciprofloxacin-containing Eudragit E100 aqueous dispersions exhibit improved in vitro activity respect to free-drug against fluoroquinolone- and methicillin-resistant S. aureus (FQ-R MRSA). 2° Reunión Internacional de Ciencias Farmacéuticas -RICIFA2012, 22-23/nov/12, Rosario. 3. Romero VL, Rosset CI, Manzo RH, Alovero FL. Efficacy of a cationic polymer as an adjunct to antibiotics with different target site against Pseudomonas aeruginosa. International Journal of Pharmaceutical Sciences and Research. Conference proceedings 2015. P-ISSN: 2320-5148. Pag. 152.4. Corti MB, Rosset CI, Guzman ML, Campagno LP, Manzo RH, Olivera ME, Alovero FL. Sistema polimérico portador de vancomicina exhibe acción bactericida frente a Pseudomonas aeruginosa multiresistente. VI Congreso Iberoamericano De Ciencias Farmacéuticas (COIFFA). XLVII Reunión Anual (SAFE). 4-6/nov/15.Córdoba, Argentina.