Eudragit EPO potencia la inactivación fotoantimicrobiana de Pseudomonas aeruginosa mediada por una porfirina catiónica

EZEQUIEL D QUIROGA; ALOVERO F; CAMPAGNO, LUCIANA P.; DURANTINI, EDGARDO; MANZO, R

San Miguel de Tucumán

Congreso; III Reunión de Fotobiólogos Moleculares Argentinos - GRAFOB DEL BICENTENARIO -; 2016

Pseudomonasaeruginosa esintrínsecamente resistente a la mayoría de los antimicrobianos de uso actual yen el ámbito clínico desarrolla resistencia rápidamente. Presenta una membranaexterna impermeable que impide acceso de antimicrobianos, colorantes ydetergentes, protegiendo la pared celular y membrana citoplasmática. Lainactivación fotoantimicrobiana es un proceso en el que participan luz visible,oxígeno y un colorante o fotosensibilizador (FS) propuesta como alternativafrente a la resistencia antimicrobiana. Para aumentar su eficacia se hanpropuesto, entre otros, el tratamiento previo con agentes que aumentan lapermeabilidad de la membrana externa así como el uso de FS con carga (+)intrínseca. En este trabajo se ampliaron estudios previosevaluando la eficacia de 5,10,15,20-tetra(4-N-metilpiridil) porfirina (TMPyP4+)en la fotoinactivación de P.aeruginosasensibles y resistentes a antimicrobianos, evaluando un amplio rango deconcentraciones (2,5-20 μM) y tiempos de irradiación. Además, se evaluó elefecto de la co-administración de TMPyP4+ (1 y 2,5 μM) y EudragitEPO (Eu), polímero catiónico que produce alteraciones en las envolturasbacterianas de P.aeruginosa.  Luego de 30 min en oscuridad conconcentraciones crecientes de FS y/o Eu, según corresponda, se expusieron los cultivos a luz visible (10-45 min).  El recuento de viables se realizó en placas deagar MH, luego de  24 hs a 37°C.  TMPyP4+ no exhibió toxicidad enoscuridad frente a P.aeruginosa en elrango evaluado y la fotoinactivación fue dependiente de la concentración de FSy del tiempo de irradiación. Se observó erradicación del inóculo con 2.5 µM deFS y 30 min, independientemente de la sensibilidad a antimicrobianos. Laco-administración del FS con Eu potenció la fotoinactivación exhibida por  TMPyP4+ en bajas concentraciones ya menores tiempos de irradiación. Esto indica que las alteracionessuperficiales producidas por el polímero catiónico están contribuyendo a lafotoinactivación inducida por el FS. Son escasos los estudios de fotoinactivaciónantimicrobiana que incluyen a P.aeruginosa, considerada una especie difícil de inactivar. Por ello, estosresultados destacan la utilidad del FS aquí estudiado. Por otro lado, el usosimultáneo de un agente que modifica las barreras superficiales de esta especiey permeabiliza esas membranas permite reducir las concentraciones de TMPyP4+requeridas. Es conocido que la utilidad de agentes antimicrobianos basados enporfirinas se ve limitado por la falta de selectividad de esta familia decompuestos. Estudios previos indican que concentraciones ≥ 20 μM de TMPyP4+exhiben toxicidad (oscuridad) frente a Candidaalbicans, considerada como modelo simple de célula eucariota. Por locual,  el efecto adjuvante generado porel polímero catiónico constituye una herramienta de gran utilidad contribuyendoa la eficacia fotoantimicrobiana de TMPyP4+ en concentracionesalejadas de las que puedan producir daño en células no bacterianas.