EVALUACIÓN DE LA PERFORMANCE PLASMATICA IN VITRO DE NUEVOS PROFÁRMACOS ANTI HIV

SCHENFELD, E.; RIBONE, S.; QUEVEDO, M.

Córdoba

Congreso; VI Congreso Iberoameiraco de Ciencias Farmacéuticas; 2015

Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba

La unión a proteínas plasmáticas resulta central en la terapia con fármacos anti HIV, tales como Zidovudina (AZT). La albúmina sérica humana (ASH) es la principal proteína transportadora de fármacos ácidos en el plasma humano. El presente trabajo aborda el estudio de la unión de nuevos profármacos ácidos de Zidovudina (AZT-Oxa; AZT-Suc; AZT-Glu; AZT-Adi) a proteínas totales de plasma, y su efecto sobre la estabilidad enzimática de los mismos. Además, se establece una correlación entre los datos experimentales obtenidos y técnicas teóricas de modelado molecular computacional.La fracción de profármacos unidos fue determinada incubando soluciones de AZT y de los nuevos profármacos (9μM) en plasma humano a 37°C durante 30 min, aislando la fracción de fármaco libre mediante ultrafiltración. Asimismo, se identificó el sitio de unión utilizando ácido salicílico (AS) como marcador del subsitio IA. Se cuantificaron los siguientes porcentajes de unión: AZT: 12,9 ± 1,4 %; AZT-Oxa: 8,0 ± 1,4 %; AZT-Suc: 33,2 ± 1,3 %; AZT-Glu: 26,8 ± 0,5 % y AZT-Adi: 34,1 ± 1,5 %. En presencia de AS, se observó que AZT mantiene su afinidad (13,1 ± 1,3 %), mientras que la de los profármacos disminuyen considerablemente: AZT-Oxa: 1,3± 1,2 %; AZT-Suc: 8,1± 1,6 %; AZT-Glu: 1,8 ± 1,3 % y AZT-Adi: 4,8± 1,3 %. Se concluye que los profármacos se unen a ASH en el subsitio I.A., mientras que AZT lo hace en el subsitio IB.La estabilidad plasmática de los profármacos fue estudiada incubando plasma humano (2ml, 20 μM de analito) a 37 ° durante 24 horas. Las muestras obtenidas se acondicionaron por extracción en fase sólida y se cuantificaron por HPLC-UV (Procedimiento validado según lineamientos ICH), cuantificándose los siguientes porcentajes de degradación: AZT-Suc: 14,2 ± 2,9 %; AZT-Adi: 30,3 ± 1,0 %; AZT-Glu: 60,1 ± 0,8 %; AZT-Oxa: 95,8 ± 1,4 %.Se emplearon técnicas de modelado molecular computacional para estudiar el reconocimiento entre los profármacos y la ASH, y a partir de estudios de docking y dinámica molecular se construyeron gráficos de interacción intermolecular. Se concluye que AZT interacciona con la cavidad hidrofóbica del sitio IB, mientras que AZT-Suc y AZT-Adi estabilizan su carga negativa con residuos de carácter básico, tales como Lys188 y Arg195. Por otra parte, AZT-Glu interacciona con Arg112 y Arg115. Por su parte, AZT-Oxa estabiliza su carga con el residuo Arg112, lo que conlleva una competencia con los ácidos grasos presentes en plasma, ocasionando un menor porcentaje de unión en relación a los otros profármacos estudiados.En conclusión, se reporta que AZT-Suc, AZT-Glu y AZT-Adi exhiben un perfil de estabilidad plasmática adecuado para su uso como profármacos, y una mayor fracción unida a proteínas plasmáticas que AZT. Dichas características podrían implicar una potencial ventaja farmacoterapéutica. Por otra parte, AZT-Oxa no presenta mejoras con respecto a AZT desde el punto de vista de su performance plasmática in vitro.