DESARROLLO Y VALIDACIÓN DE UN MÉTODO DE HPLC PARA LA CUANTIFICACIÓN DE CIPROFLOXACINO EN PLASMA Y ORINA HUMANO

GUZMÁN, ML; LUCIANI GIACOBBE, LC; SANCHEZ, MF; BREDA SA; MANZO, RH; OLIVERA, ME

Córdoba

Congreso; VI Congreso Iberoamericano de Ciencias Farmacéuticas; 2015

Departamento de Farmacia, Facultad de Ciencias Químicas, UNC

Ciprofloxacino (CIP) es un fármaco antimicrobiano de amplio espectro perteneciente a la familia de las fluoroquinolonas. Los niveles urinarios son útiles para establecer su eficacia terapéutica. El objetivo del presente trabajo fue el desarrollo y la validación de un método analítico de HPLC para la determinación de CIP utilizando como matrices biológicas plasma y orina humano, a los fines de ser utilizado en posteriores estudios de biodisponibilidad oral. Se adecuó la metodología descripta por Gonzales y cols para la cuantificación de CIP en plasma y tejido uterino de yeguas. Muestras blanco de plasma fueron adicionadas con una solución de CIP y Enrofloxacina (estándar interno) para determinar la linealidad, especificidad, % de recuperación, precisión, exactitud, límite de cuantificación, estabilidad y robustez del método. El procesamiento de las muestras de plasma se realizó mediante extracción en fase sólida utilizando cartuchos con adsorbente C18 utilizando agua y metanol como eluyentes. Las muestras fueron evaporadas a sequedad y reconstituidas en fase móvil. La separación cromatográfica se llevó a cabo empleando una columna C18 (250 x 4.6 mm, 5 µm) a 30ºC. Fase móvil: 16% de mezcla Acetonitrilo: Metanol (13:1) y 84% de Agua (0.4% de trietilamina y 0.4% de ácido fosfórico, a pH= 2.5). Volumen de inyección 100 µl; Flujo: 1.2 ml/min. Detección fluorescencia a λex=294 y λem=500nm. Para la cuantificación de CIP desde orina, se adicionaron cantidades crecientes de una solución de CIP a una alícuota de orina blanco. A continuación se adiciono enrofloxacino y se realizó una dilución con fase móvil. Todos los parámetros determinados se encuadraron dentro de los criterios aceptados internacionalmente. Se observó linealidad del método en las concentraciones analizadas (62,5- 2000 ng/mL y 160-8000 ng/mL para plasma y orina, respectivamente). La curva de calibrado construida utilizando plasma se corresponde con la ecuación y = 0,00048x-0,00715 (r2= 0,992). La ecuación obtenida para orina fue y = 0,310 x + 0,0632 (r2= 0,993). La especificidad del método fue constatada en ambos casos. La precisión inter e intradía para las muestras de plasma fue inferior al 15%, excepto para la concentración inferior que fue del 16%, con una exactitud asociada inferior al 15% en todos los casos. Para las muestras de orina, todos los valores de precisión y exactitud fueron inferiores al 6%. Se comprobó estabilidad luego de un ciclo de congelado, obteniéndose un coeficiente de variación 93% y >96% respectivamente, con un %RSD