DESARROLLO Y VALIDACIÓN DE MÉTODOS DE HPLC PARA LA CUANTIFICACIÓN DE RIFAMPICINA E ISONIAZIDA EN PLASMA HUMANO

LUCIANI GIACOBBE, LC; GUZMÁN, ML; BREDA, AS; MANZO, RH; OLIVERA, ME

Córdoba

Congreso; VI Congreso Iberoamericano de Ciencias Farmacéuticas; 2015

Departamento de Farmacia, Facultad de Ciencias Químicas, UNC

Rifampicina (RIF) e isoniacida (ISO) son antibióticos usados en combinación a dosis fija (CDF) para el tratamiento de la tuberculosis. En nuestro laboratorio hemos desarrollado una nueva formulación optimizada de RIF e ISO en CDF cuya biodisponibilidad será evaluada en un estudio farmacocinético. El objetivo de éste trabajo fue el desarrollo y la validación de una metodología analítica para la determinación RIF e ISO en plasma, a los fines de ser utilizados en estudios de biodisponibilidad oral. RIF: Muestras de plasma humano blanco, enriquecidas con RIF, fueron purificadas mediante precipitación de proteínas con acetonitrilo. Para la cuantificación se utilizó un HPLC-UV, con columna C18 de fase reversa (250 x 4,6 mm) termostatizada a 30°C. La fase móvil fue metanol:solución reguladora fosfato de potasio pH=7 (75:25) a 0,5mL/min. Se añadió rifamicina como estándar interno. ISO: se adecuó la metodología descripta por Gupta (1988) (1) utilizando atenolol como estándar interno. Para su cuantificación se derivatizó con p-hidroxibenzaldehído previo a la precipitación de proteínas con ácido trifluoroacético y metanol.Se construyeron curvas de calibrado entre 0,03 y 37,80 μg/mL para RIF y 0,18 y 35,68 μg/mL para ISO. Se evaluó selectividad, precisión, exactitud, linealidad de la respuesta, límite de cuantificación, % de recuperación, estabilidad a corto plazo, tras tres ciclos de congelado/descongelado y post preparativa. Los criterios de aceptación fueron los establecidos por la normativa internacionalmente reconocida. Ambos métodos fueron selectivos. El método de RIF fue lineal, exacto y preciso en el rango 1,51-37,80 μg/mL, con error relativo% (EE) ≤6,6% y un coeficiente de variacion % (CV) ≤ 8,6% en todos los casos. Para ISO, se determinó linealidad, exactitud y precisión entre 0,18-35,68 μg/mL, con un EE ≤ 15,0% y CV ≤ 12,0%. El límite de cuantificación fue de 1,51 y 0,18 μg/mL para RIF e ISO, respectivamente. La curva de calibrado de RIF se corresponde con la ecuación y = 0,03103x + 0,00249 (R² = 0,99995). La ecuación obtenida para ISO fue y = 0,02960x + 0,00046 (R² = 0,99992). Los porcentajes de recuperación de RIF desde plasma fueron 97,0 y 99,0%; CV ≤0,1%. Los porcentajes de recuperación de ISO fueron 89,8 y 96,4; CV ≤ 3,7%.Las muestras de RIF e ISO fueron estables tras 6h de disposición en la mesada (EE ≤ 0,2% y 8,6% respectivamente) y, luego de su procesado, por 24h en el carrusel del inyector (EE ≤ 0,4% y 13,3% respectivamente). Las muestras de RIF soportaron tres ciclos de congelado/descongelado (EE tercer ciclo 4,2%) mientras que las de ISO, sólo dos (EE segundo ciclo 15,4%). Ambos métodos desarrollados resultan adecuados, robustos y reproducibles para la cuantificación de RIF e ISO desde plasma humano.