DETERMINACIÓN DEL COEFICIENTE DE PARTICIÓN DE RIFAMPICINA EN UNA BICAPA LIPÍDICA MEDIANTE TITULACIÓN ISOTÉRMICA CALORIMÉTRICA

MORA, M., SAMELO, J., GRANERO, G., MORENO, M.

Córdoba

Congreso; VI Congreso Iberoamericano de Ciencias Farmacéuticas; 2015

Tras la administración oral, un fármaco debe superar varios obstáculos antes de alcanzar la circulación sistémica. La absorción, distribución, metabolismo y eliminación (ADME) de un fármaco requieren de su paso por las membranas biológicas. Para estudiar este aspecto es muy importante el desarrollo de una membrana artificial adecuada, que simule el comportamiento de los componentes naturales en la membrana biológica. Los liposomas son vesículas esféricas compuestas por fosfolípidos que poseen un arreglo molecular ordenado y pueden explicar las fuerzas electrostáticas de interacción de los fosfolípidos con otras moléculas, por lo que son excelentes modelos para predecir la interacción de fármacos con las membranas biológicas.La tuberculosis (TB) es una enfermedad infecciosa siendo, entre las enfermedades transmisibles, la segunda causa de enfermedad y muerte en el mundo. Rifampicina (RIF) es un fármaco antituberculoso de primera línea, que actúa suprimiendo la síntesis de ARN y proteínas, provocando la muerte de las células bacterianas.La titulación calorimétrica isotérmica (ITC) es una técnica ampliamente utilizada para estudios cuantitativos de una gran variedad de interacciones biomoleculares, que puede ser utilizada para la determinación del coeficiente de partición (KP) de una droga con membranas lipídicas.El objetivo de este proyecto fue determinar el KP de Rifampicina (RIF) en una bicapa lipídica de 1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfocolina (POPC) mediante ITC.Los liposomas (LUVs) se prepararon de acuerdo al método de hidratación del film y se caracterizaron mediante la determinación del tamaño de partícula y de la multilamelaridad de los mismos. Los LUVs de POPC obtenidos presentaron un tamaño de 100nm y la fracción de lípido obtenida en la bicapa interna fue de aproximadamente 30%.Para la determinación del KP de RIF entre la biacapa de POPC y buffer se añadieron alícuotas de LUVs de POPC a una solución de RIF. Para los experimentos de ITC se utilizaron dos protocolos: i) uptake, en el que los liposomas se inyectaron dentro de una solución de RIF contenida en la celda, y ii) release, en la que se inyectó una solución de liposomas conteniendo el fármaco dentro de la celda que contiene buffer. El mejor ajuste global de los resultados de ambos protocolos permitió la caracterización del KP. La titulación siguiendo el protocolo de uptake se realizó en buffers con diferentes entalpías de ionización para obtener la variación de entalpía intrínseca y el cambio en el estado de ionización del fármaco tras la asociación con los liposomas.Los resultados obtenidos a 37oC indican un coeficiente de partición relativamente alto (KP = 1,4x104), impulsado principalmente por el efecto hidrófobo (DH intrínseca = 19kJ/mol). El estado de ionización de RIF cambió significativamente al asociarse con la membrana resultando cargada negativamente (liberación de 0,7H+), mostrando un ritmo lento de la translocación a través de la membrana.