. Desarrollo de un método bioanalítico para estudios de permeación intestinal de hidroclorotiazida

ONNAINTY, RENÉE; SCHENFELD, ESTEBAN M.; LONGHI, MARCELA R.; QUEVEDO, MARIO A.; GRANERO, GLADYS E.

CÓRDOBA

Congreso; VI Congreso Iberoaméricano de Ciencias Farmacéuticas. 47° Reunión Anual de SAFE. III Congreso Sudamericano de Biofarmacia y Farmacocinética; 2015

El objetivo de este trabajo fue el desarrollo y la validación de una metodología bioanalítica para la cuantificación de hidroclorotiazida (HCT) por HPLC-UV, en medio de cultivo TC199, utilizado en los estudios de permeación intestinal realizados aplicando la técnica ex vivo de saco intestinal evertido en ratas. La HCT es un diurético ampliamente utilizado para el tratamiento de la hipertensión. Este principio activo (PA) pertenece a la clase IV del Sistema de Clasificación Biofarmacéutico, debido a su baja solubilidad en agua y baja permeabilidad intestinal.La preparación de las muestras analíticas para el HPLC requirió de la extracción en fase sólida (SPE) de la HCT, utilizando cartuchos de sílica (Sep Pak Plus® 60 mg, Phenomenex®) y una solución de H2O:MeOH 90:10 como solvente de elusión y lavado. La HCT se eluyó del cartucho con acetonitrilo (ACN), siendo posteriormente evaporada a sequedad y resuspendida en MeOH (400 μl) para su cuantificación por HPLC.El análisis cromatográfico se realizó utilizando una columna Restek C18 de 15 cm x 4,5 mm x 5 μm, con precolumna C18 Phenomenex, con una fase móvil de H2O acidificada con ácido acético (pH 3,6): MeOH 80:20, a un flujo de 1 ml/min. El volumen de inyección fue de 15 μl y la columna se mantuvo termostatizada a 35 °C. Se utilizó un detector UV-Vis a una longitud de onda de 270 nm. Como estándar interno se eligió cafeína.La metodología bioanalítica propuesta se validó en relación a la selectividad, límite de detección, recuperación, exactitud y precisión. El método propuesto fue selectivo y lineal en un rango de concentraciones de 1.86x10-6M ? 8.9x10-5 M (r2= 0.99), con un LOD de 1.7x10-8M y un LOQ de 1.86x10-6 M, con una recuperación mayor al 98%, una exactitud de 98 ? 110% y una precisión inter e intra día con un R.S.D < 4%.En el contexto del desarrollo bioanalítico proyectado a estudios de permeabilidad intestinal, también se evaluó la viabilidad ex vivo del tejido intestinal en las condiciones de ensayo. Para ello, se determinó la capacidad concentración de glucosa de los segmentos intestinales aislados en medio de cultivo TC199. Estos resultados evidenciaron que la relación de concentración de glucosa entre solución serosal/solución mucosal fue mayor a la unidad durante los 120 min de ensayo, confirmando la capacidad de concentración de la misma y la consiguiente viabilidad del tejido.El método validado fue exitosamente aplicado a la determinación de la permeabilidad intestinal de HCT. Dichos estudios se llevaron a cabo empleando soluciones mucosales conteniendo 0.18 mg/ml de HCT, cuantificándose un flujo de 0.0647 μg/min y la permeabilidad aparente (Papp), 0.145x10-4 cm/min del PA.En base a los resultados obtenidos, se puede concluir que se logró desarrollar y validar satisfactoriamente una metodología bioanalítica adecuada para la cuantificación de HCT.