IIBYT   23944
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOLOGICAS Y TECNOLOGICAS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Mecanismo de unión de vesículas extracelulares a los espermatozoides
Autor/es:
MORENO-IRUSTA, A; FRANCHI, NA; GIOJALAS, LC
Lugar:
Córdoba
Reunión:
Jornada; XII Jornadas Científicas Sociedad de Biología de Córdoba; 2019
Institución organizadora:
Sociedad de Biología de Córdoba
Resumen:
Introducción. Las vesículas extracelulares (VE) son estructuras membranosas formadas por una bicapa lipídica y compuestas por proteínas, lípidos, ARN, ADN y metabolitos. Son secretadas por casi todos los tipos celulares e incorporadas por células receptoras en las cuales modulan el estado fisiológico. Recientemente han sido identificadas a lo largo del tracto reproductor femenino, y se ha sugerido su participación en la regulación de la fisiología espermática. Las VE interaccionan con las células blanco mediante diferentes mecanismos; en espermatozoides (ES), podrían ejercer su efecto a través de la señalización intracelular inducida por la activación de receptores de superficie o mediante la fusión a la membrana plasmática. Datos de nuestro laboratorio y de otros grupos revelan los efectos de las VE sobre distintos procesos, no obstante, la cinética de unión de las VE a los ES y los posibles mecanismos moleculares a través de los cuales interaccionan no han sido estudiados. Objetivos. Analizar la cinética con la cual las VE se incorporan a los ES y determinar si dicha interacción tiene lugar mediante la fusión de membranas. Metodología. Se usaron ES bovinos criopreservados y VE aisladas de la región del istmo y el ámpula oviductal. Para estudiar la cinética de unión a los ES, las VE fueron marcadas con el fluoróforo PKH26 y calceína, y la transferencia de la marca fluorescente a las células fue determinada por citometría de flujo en la población de células viables. Por otro lado, se llevaron a cabo ensayos de fusión de membranas marcando las VE con la sonda fluorescente auto-apagable R18 y monitoreando la intensidad de fluorescencia por espectrofluorimetría. Resultados. Por citometría de flujo se observó que, a los pocos minutos de incubación con las VE una población de ES adquiere la marca fluorescente. Esta incorporación continúa hasta alcanzar una meseta alrededor de las 2 h, en la cual alrededor del 60 % de las células viables presenta marca. Los ensayos de fusión mostraron un aumento en el perfil de fluorescencia sólo cuando se adicionaron los ES, indicando la ocurrencia de la fusión de membranas. Además, ensayos en presencia de distintas concentraciones de calcio y a diferentes pH, sugieren que dicho proceso estaría desfavorecido a pH ácido. Discusión. Nuestros resultados permiten concluir que la fusión de membranas constituye uno de los posibles mecanismos mediante los cuales las VE regulan la fisiología espermática. Datos previos mostraron efectos de las VE sobre procesos con distinta cinética, por lo tanto, es necesario profundizar los estudios para determinar si existen otros mecanismos involucrados, y de ser así, cuál de ellos se asocia a cada uno de los efectos fisiológicos observados.