Cuantificación y funcionalidad de beta-gal autoagregada en cuerpos de inclusion

FLORES, S; CLOP PD; SANCHEZ JM; PERILLO MA

La Falda

Congreso; XXI Jornadas Sociedad de Biología de Córdoba; 2017

En nuestro laboratorio estamos interesados en laproducción y caracterización de proteínas agregadas en cuerpos de inclusión(CI) como fuente de proteína activa, con característicasfuncionales y de estabilidad particulares. Demostramos que los CI de β-Galpresentan una gran estabilidad frente a la conservación a 4°C y una mayorresistencia a la inactivación térmica y por pH con respecto a la versiónsoluble de la proteína. Los avances en estos estudios se vieron dificultadospor la gran variabilidad intra e inter ensayo observada en los valores de lacantidad de proteína β-Gal presente en los CI arrojados por el método de Lowry.Este comportamiento podría deberse a la restricción que el empaquetamiento dela proteína en los CI podría estar ejerciendo al acceso de los reactivos (Cu++,reactivo de Folin-Cicalteau). Asimismo, la determinación de la actividad catalíticapodría estar también afectada por limitaciones en la difusión del sustrato y ensu accesibilidad al sitio activo de las moléculas de β-Gal inmersa en los CI. Elobjetivo del presente trabajo fue obtener valores precisos y exactos de lacantidad de la proteína β-Gal presente en CI y mejorar las determinaciones deactividad catalítica (AC). Resultados: a) se desarrolló con éxito un método basadoen correlacionar la densitometría de una SDS-PAGE con la cantidad de proteínasembrada, b) se encontró que la desorción de β-Gal del CI aumenta en medios debaja presión osmótica y c) que las diluciones sucesivas exhiben una AC crecienteposiblemente debido a la desorción y subsecuente exposición de los sitiosactivos de β-Gal inicialmente ocultos en el agregado.