CUANTIFICACIÓN Y FUNCIONALIDAD DE beta-GAL AUTOAGREGADA EN CUERPOS DE INCLUSION

CLOP, PD; FLORES, SANDRA SOLEDAD; PERILLO, MARÍA ANGÉLICA; SANCHEZ, JULIETA MARÍA

La Falda. Córdoba Capital

Jornada; XXI Jornadas Sociedad de Biología de Córdoba; 2017

Sociedad de Biologia de Córdoba

En nuestro laboratorio estamos interesados en la producción y caracterización de proteínas agregadas en cuerpos de inclusión (CI) como fuente de proteína activa, con características funcionales y de estabilidad particulares. Demostramos que los CI de β-Gal presentan una gran estabilidad frente a la conservación a 4°C y una mayor resistencia a la inactivación térmica y por pH con respecto a la versión soluble de la proteína. Los avances en estos estudios se vieron dificultados por la gran variabilidad intra e inter ensayo observada en los valores de la cantidad de proteína β-Gal presente en los CI arrojados por el método de Lowry. Este comportamiento podría deberse a la restricción que el empaquetamiento de la proteína en los CI podría estar ejerciendo al acceso de los reactivos (Cu++, reactivo de Folin-Cicalteau). Asimismo, la determinación de la actividad catalítica podría estar también afectada por limitaciones en la difusión del sustrato y en su accesibilidad al sitio activo de las moléculas de β-Gal inmersa en los CI. El objetivo del presente trabajo fue obtener valores precisos y exactos de la cantidad de la proteína β-Gal presente en CI y mejorar las determinaciones de actividad catalítica (AC). Resultados: a) se desarrolló con éxito un método basado en correlacionar la densitometría de una SDS-PAGE con la cantidad de proteína sembrada, b) se encontró que la desorción de β-Gal del CI aumenta en medios de baja presión osmótica y c) que las diluciones sucesivas exhiben una AC creciente posiblemente debido a la desorción y subsecuente exposición de los sitios activos de β-Gal inicialmente ocultos en el agregado.