IIBYT   23944
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOLOGICAS Y TECNOLOGICAS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Modulación de la actividad enzimática de la acetilcolinestarasa eritrocitaria bovina (AEB) en membranas naturales transferidas a filmes de Langmuir-Blodgett (LB)
Autor/es:
FELSZTYNA I; PERILLO MA; CLOP EM
Lugar:
Santiago del Estero
Reunión:
Congreso; XLIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica (SAB); 2015
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofísica
Resumen:
La AEB es una enzima de membrana plasmática con unanclaje hidrofóbico tipo GPI. Este contacto permitiría la transmisión deinformación proteína-interfase, afectando su actividad. En consecuencia, losfilmes LB permitirían sensar los efectos del empaquetamiento molecular de lamembrana sobre la actividad de la AEB. Se prepararon filmes de Langmuir (FL) a partir de suspensionesde vesículas de membranas eritrocitarias bovinas purificadas (MEB) y seestudiaron sus propiedades interfasiales. Las isotermas π-área mostraron una transiciónbidimensional πt=15,5±1,4mN/m correspondiente conun módulo compresional Kt=66,04±2,52 mN/m. Laπ de colapso fue πc=45,4±1,2 mN/m y Kc=36,6±0,7 mN/m. Kt yKc indican un comportamiento tipo líquido expandido a lo largo detoda la isoterma. Los FL setransfirieron a soportes hidrofóbicos planos a 10 y 35 mN/m (LB10yLB35), y se utilizaron para estudiar la cinética de hidrólisis deacetiltiocolinaproduciendotiocolina + acetato.En todos los tratamientos obtuvimosuna cinética de tipo michaeliana, a diferencia de lo observado con otrasproteínas incorporadas a membranas, donde el aumento de π indujo un cambio de cinética.ConMEBensuspensión obtuvimos una Vmax=3,41±0,15 y KM=0,11±0,02.En LB10, se obtuvo una Vmax=0,021±0,002 y una KM=0,037±0,017,mientras que en LB35, Vmax=0,047±0,003 y KM=0,079±0,023(Vmax se expresa en nmoles P/min·µg prot. y KM en mM).La exposición deAEBa la interfase aire-agua, modificaría su estructura 3D hacia unaconformación de mayor afinidad para la formación del complejo E-S. Ladisminución de Vmax en los filmes LB respecto a lo observado envesículas, podría deberse a una transferencia selectiva de proteínas desde el FLal soporte sólido. La recuperación de la AEB mejoraría con un mayorempaquetamiento molecular a mayor π de transferencia, reflejado por el aumentosignificativo en la Vmax si se comparan los LB10 con los LB35.