Efectos de compuestos fenólicos gabaérgicos sobre la estabilidad de membranas modelo

ANGELETTI S; PERILLO M ; GARCIA D

Carlos Paz-Córdoba

Encuentro; NanoCórdoba; 2012

UNC-CONICET

EFECTOS DE COMPUESTOS FENÓLICOS GABAÉRGICOS SOBRE LA ESTABILIDAD DE MEMBRANAS MODELO. S.C. Angeletti, M.A. Perillo y D.A. García. Instituto de Investigaciones Biológicas y Tecnológicas (IIBYT), CONICET-Universidad Nacional de Córdoba), Av. Vélez Sarsfield 1611, Córdoba (5016), Argentina. E-mail:sofia3677@hotmail.com. El receptor GABAA (R-GABAA) es el principal receptor inhibitorio del Sistema Nervioso Central. Nuestro grupo ha descripto que varios compuestos fenólicos derivados del propofol, un conocido agente gabaérgico, poseen efectos estimulatorios sobre el R-GABAA. Por otra parte, demostramos que estos compuestos son altamente lipofílicos con capacidad para interactuar con membranas modificando sus propiedades. De esta manera, teniendo en cuenta que el R-GABAA está inserto en una estructura supramolecular altamente dinámica como la membrana, es posible sugerir que en los efectos farmacológicos demostrados para este tipo de compuestos podrían subyacer fenómenos inespecíficos como disparadores de la modulación de la organización molecular. Para investigar esta hipótesis se desarrolló un método espectrofluorimétrico para la determinación de la permeabilidad al Cl- a través de membranas modelo, y se ensayó, en este modelo, el efecto del compuesto fenólico clorotimol. Las técnicas más comunes para medir la concentración de Cl- utilizan electrodos intracelulares, cloruro radioactivo o indicadores fluorescentes sensibles a Cl-. En este trabajo se utilizó el fluorescente MEQ (6-metoxy-N-etyl quinolina) cuya fluorescencia puede ser apagada por iones halógenos tales como el Cl-. Se analizó la disminución en la intensidad de fluorescencia emitida por MEQ a diferentes concentraciones del Cl- lo cual permitió obtener un valor de la constante de Stern-Volmer de 125 M-1 en solución acuosa. Posteriormente se prepararon vesículas unilamelares grandes (LUVs) de fosfatidilcolina de huevo:colesterol (90%:10%) con un diámetro de ~200 nm (determinado por dispersión dinámica de la luz, DLS) en presencia de MEQ. Mediante cromatografía de exclusión molecular se separaron las facciones de fluoróforo atrapado en liposomas y el libre. Para esto, en las diferentes fracciones eluídas de la columna, se evaluó el contenido de fosfato y la turbidez (asociados con la presencia de lípidos) y la intensidad de fluorescencia emitida por MEQ. La co-elución de lípido y fluorescencia correspondió a MEQ atrapado mientras que la presencia de un pico de elución con alta intensidad fluorescencia y ausencia de lípidos se interpretó como MEQ libre. Finalmente, se utilizó la fracción de MEQ atrapado en LUVs en un medio dispersante conteniendo Cl-, en presencia y en ausencia del compuesto fenólico clorotimol. Los resultados indican que el clorotimol interactuaría con la membrana desestabilizándola lo cual lleva al aumento en su permeabilidad al Cl-. Esto permitiría que MEQ y Cl- se pongan en contacto tal como se demostró por un aumento en el apagamiento de la fluorescencia del MEQ en presencia de clorotimol respecto al control sin este compuesto. Este trabajo fue financiado por SECyT-UNC, FONCyT y CONICET.