Condiciones de producción y comportamiento térmico de lactasa recombinante.

LUPI, G; PERILLO, MA; SANCHEZ, JM

Actas del IV CICYTAC 2012

Universidad Nacional de Cordoba

Lugar: Cordoba; Año: 2013; p. 210 - 220

El objetivo del presente trabajo fue comparar la actividad de la beta-galactosidasa nativa de Escherichia coli (b-GalE.coli) con respecto a b-GalHis6. Esta última es una proteína recombinante derivada de b-GalE.coli con el agregado de 6 residuos de histidina (His-tag) fusionados en el extremo carboxilo terminal. Esta modificación facilitó su purificación por cromatografía de afinidad ión-metal (IMAC). La hidrólisis de lactosa catalizada por b-Gal se determinó con el método de la glucosa oxidasa por espectrofotometría visible frente condiciones variables de temperatura, pH, concentración de lactosa. Nuestros resultados mostraron que, ambas enzimas presentan un perfil de actividad similar frente a pH y temperatura. Por otro lado, la enzima recombinante presentó una leve resistencia a la inactivación por temperatura y pH con respecto a la enzima nativa. Ambas enzimas presentaron una cinética michaeliana y similar afinidad por la lactosa (KM≅4,2 mM). Sin embargo, en todos los casos la actividad específica de b-GalHis6 fue menor con respecto a b-GalE. coli sugiriendo que la presencia de histidinas podría afectar la actividad enzimática al nivel del mecanismo de reacción. Sin embargo, no se descartan posibles diferencias conformacionales entre estas dos variantes de la enzima.