Mecanismos antineoplásicos activados por calcitriol y menadiona en células de cáncer de mama en cultivo

PICOTTO G; TOLOSA DE TALAMONI N; GUIZZARDI S; BOHL L; RODRÍGUEZ V

Córdoba

Jornada; XXII Jornadas Científicas de la Sociedad de Biología de Córdoba.; 2019

El 1,25 (OH)2D3 o calcitriol (D), metabolito activo de la vitamina D3, además de sus acciones clásicas sobre la homeostasis del calcio y del fósforo, regula la proliferación, diferenciación, angiogénesis y muerte en células de cáncer de mama. Estos efectos se logran con altas dosis de D, lo que genera hipercalcemia como efecto secundario. En nuestro laboratorio se demostró que BSO (L-butionina-S,R-sulfoximina), droga que inhibe la síntesis de glutatión (GSH), potencia el efecto antiproliferativo de D tanto en células que expresan receptor de estrógenos (MCF-7) como en células de cáncer de mama triple negativas (HMLER), es decir carentes de receptores de estrógenos, de progesterona y del factor de crecimiento epidérmico. También se observó que menadiona (MEN) o vitamina K3, droga que depleciona los niveles de GSH, potencia la disminución del crecimiento celular producido por D en células de cáncer de mama MCF-7, aunque su mecanismo no está del todo claro. El objetivo de este trabajo fue continuar el estudio de los mecanismos moleculares involucrados en el efecto antiproliferativo de D combinado con MEN en las células de cáncer de mama MCF-7. Estas células fueron tratadas durante 6 o 96 hs con D 100 nM, MEN 5 o 10 μM, ambas drogas o su vehículo (etanol). La proliferación celular se determinó por la técnica de violeta cristal. El potencial de membrana mitocondrial por citometría de flujo. La funcionalidad mitocondrial se evaluó por la prueba de Estrés Mito Celular Agilent Seahorse XFp. Por espectrofotometría se midieron los niveles de anión superóxido (?O2-) y óxido nítrico (NO?). La formación de organelas vesiculares ácidas (OVAs) se evaluó por microscopía de fluorescencia y la expresión proteica de LC3-II por western blot. El análisis estadístico se realizó mediante ANOVA seguido por el test de Bonferroni. Se observó disminución en la viabilidad de las células MCF-7 tratadas con D, MEN y D+MEN durante 96 hs, siendo significativamente mayor el efecto del tratamiento combinado en comparación con el de los tratamientos individuales. Con respecto a la función mitocondrial, el tratamiento de D+MEN indujo disminución en la producción de ATP y en la eficiencia de acoplamiento, aumento en la pérdida de protones, además de incremento en el porcentaje de células con el potencial de membrana mitocondrial disminuido. Este tratamiento también produjo aumento en el contenido de NO?. El incremento en la producción de ?O2- fue mayor con la combinación de D+MEN que con las drogas individuales. Con respecto a la autofagia, la expresión proteica de LC3-II fue mayor con las drogas usadas tanto individualmente como combinadas durante 6 hs, aunque con D ese incremento fue aún mayor. Las OVAs se incrementaron en aquellas células tratadas con D, MEN y ambas drogas simultáneamente por 96 hs, siendo el efecto mayor con el tratamiento combinado. En conclusión, MEN incrementaría el efecto antiproliferativo de D sobre las células MCF-7 mediante aumento del estrés oxidativo y nitrosativo, alteración en la funcionalidad mitocondrial e inducción de autofagia.