Glutamina: un aminoácido protector de la absorción intestinal de calcio

PEREZ A; MOINE L; TOLOSA DE TALAMONI N; DIAZ DE BARBOZA, G

Ba As

Congreso; Primer Congreso Conjunto de AAOMM y SAO; 2016

Glutamina(GLN) es una fuente importante de energía para células con una alta tasa de recambiocomo son las células epiteliales de la mucosa intestinal. Tiene propiedadesantiapoptóticas y participa en el mantenimiento del estado redox celular en diferentestejidos expuestos a drogas pro-oxidantes. En lapráctica clínica, GLN se utiliza para la recuperación de pacientes críticos,pero su mecanismo de acción aún no está completamente dilucidado. En trabajosprevios de nuestro laboratorio se demostró que la administración de 1 g/Kg pcde GLN previene la disminución de la absorción intestinal de Calcio (Ca+2) desencadenada por menadiona(MEN), una droga pro-oxidante de uso clínico. Dado que hay investigaciones queproponen que la administración de altas dosis de GLN podría tener efectos secundariosno deseados, en este trabajo nos propusimos estudiar el posible rol protectordel tratamiento con dosis bajas de GLN sobre la disminución de la absorciónintestinal de Ca+2 causadapor MEN y evaluar los mecanismos subyacentes. Para ello se emplearon pollos Gallus gallus domesticus de 4 semanas deedad alimentados con una dieta comercial (GEPSA Feeds, Argentina). Se evaluarondiferentes tiempos y dosis de GLN/Kg de peso corporal (pc) administrados porvía gastrointestinal antes del tratamiento con 2,5 μmol de MEN/Kg pc por víaintraperitoneal. Animales tratados con vehículo se emplearon como controles. Sedeterminó la absorción intestinal de Ca+2 mediante la técnica delasa ligada in situ empleando Ca45como trazador. En homogeneizados de mucosa duodenal se cuantificó el contenidode anión superóxido (.O2-)y glutatión intracelular (GSH) y se evaluó la actividad de las enzimas antioxidantescatalasa (CAT) y superóxido dismutasa (SOD) empleando métodosespectrofotométricos. Se determinó la fragmentación del ADN mediante la técnicade TUNEL y la expresión de proteínas pro- y anti-apoptóticas (FAS-R, FAS-L,BAX, Calbindina D28K CB) por la técnica de western blot utilizandoanticuerpos específicos. Se estudió la actividad de la proteína efectora de la apoptosiscaspasa 3 por ELISA. Los resultados mostraron que 0,5g de GLN/kg pc 30 minantes de la administración de MEN constituyen la menor dosis y el menor tiempode tratamiento capaces de prevenir la disminución de la absorción intestinal deCa+2 provocada por MEN. El tratamiento conGLN evitó la generación de radicales .O2- y permitiómantener el contenido GSH intracelular a valores similares a los de loscontroles; además impidió el incremento de la actividad de las enzimas SOD yCAT desencadenada por MEN. En relación con la apoptosis, se comprobó que laadministración previa de GLN evita el incremento del 30% en el número decélulas TUNEL positivas generado por la quinona. La determinación de laexpresión de proteínas pro-apoptóticas reveló que GLN bloquea el aumento de FAS-Ry FAS-L producido por la droga oxidante, mientras que Bax no presentómodificaciones en los diferentes grupos experimentales. La expresión de CBdisminuyó después del tratamiento con MEN, efecto que fue prevenido con laadministración previa del aminoácido. En conclusión, la administración de unadosis única de 0,5 g/Kg pc de GLN 30 min antes que MEN previene la disminuciónde la absorción intestinal de Ca+2porque evita la muerte de enterocitos duodenales por preservación de lasdefensas antioxidantes celulares y bloqueo de la vía apoptótica extrínseca.