Efecto regulatorio del estradiol sobre la palmitoilación del RE alfa y la proliferación de células adenohipofisarias normales y tumorales

SOSA LDV; PETITI JUAN PABLO; TORRES ALICIA I; GUIDO CAROLINA BEATRIZ; PICECH FLORENCIA; DE PAUL ANA LUCÍA; GUTIÉRREZ SILVINA

Cordoba

Jornada; XVII Jornadas de Investigación Científica; 2016

Fac de Cs Medicas, UNC

Previamente hemos demostrado que estradiol (E2), a través del receptor estrogénico alfa de membrana (REαm) modula la actividad funcional de células adenohipofisarias. El agregado del residuo palmitato al RE, palmitoilación, es importante para su localización en membrana plasmática. El objetivo fue determinar la implicancia de la palmitoilación del REα en la activación de señales iniciadas en la membrana por E2 que modulan la actividad proliferativa de células adenohipofisarias normales y tumorales. Cultivos primarios adenohipofisarios de ratas Wistar hembra y la línea GH3 fueron tratados conE2 (10nM) por 30 min. La palmitoilación del RE fue determinada por el método de intercambio de acyl-biotina. La expresión del REαm fue evaluada por biotinilación de proteínas de membrana y la asociación del REαm y caveolina-1(cav-1) por inmunoprecipitación. La proliferación celular fue analizadaluego de 24h de incorporación de BrdU por inmunocitoquímica y la expresión del REα, cav-1 y ERK total y fosforilada por WB. La participación de las palmitoilasas fue analizada utilizando el inhibidor 2bromo palmitato (2BP, 10 μM). Los niveles de ARNm de DHHC-7 y DHHC-21 se determinaron por qPCR luego de 3, 6, 9 h de estímulo con E2. Estadística: Test-t. El REα palmitoilado fue detectado en células adenohipofisarias normales y GH3. La inhibición de lapalmitoilación del REα indujo pérdida de su localización en membrana e inhibición de la asociación de REα/cav-1 en cultivos primarios y GH3. En ambos cultivos celulares, los niveles de ARNm de DHHC-7 y DHHC-21 disminuyeron luego de 3h de incubación con E2, alcanzando niveles similares al control luego de 6h. En cultivos primarios, E2 no produjo cambios en la actividad mitogénica,observándose inhibición de la fosforilación de ERK1/2 con 2BP. Sin embargo, E2 aumentó la proliferación de células GH3, lo cual se correlacionó con la fosforilación de ERK1/2, efectos que fueron inhibidos por 2BP.Estos resultados sugieren que el REα palmitoilado contribuye a la acción proliferativa del E2 iniciada en la membrana plasmática en la línea adenohipofisaria tumoral y que E2 podría modular las palmitoilasas DHHC-7 y DHHC-21 regulando así la expresión del REα de membrana de células adenohipofisarias normales y tumorales.