Caracterización de células stem aisladas de adenomas hipofisarios e implicancia de la sobreexpresión de SOX2 sobre el metabolismo celular

VELAZQUEZ F; GUTIÉRREZ SILVINA; SOSA LILIANA DEL VALLE; CAPUTTO BEATRIZ; GUIDO CAROLINA BEATRIZ; TORRES ALICIA; PEREZ PABLO ANÍBAL; MUKDSI JORGE

Cordoba

Jornada; XVII Jornadas de Investigación Científica; 2016

Fac de Cs Medicas, UNC

Resultados previos de nuestro laboratorio, han permitido inferir que células hipofisarias que expresanmarcadores de células stem (CS) y cancer stem cells (CSC) estarían involucradas en laetapas tempranas del desarrollo tumoral. Además, la sobre-expresión del factor de transcripciónSox2, asociado a CS, estaría vinculada con la formación de tumores. El objetivo de este trabajo fueseleccionar y caracterizar la población de CS que crece en suspensión como esferoides y expresanmarcadores específicos a partir de cultivos primarios de tumores hipofisarios experimentales.Además, se propone analizar si la sobreexpresión de Sox2 modifica el comportamiento de la líneatumoral hipofisaria GH3.Las SC fueron aisladas a partir de cultivos primarios de tumores hipofisarios de ratas hembrasFischer estrogenizadas por 30 días. Las SC fueron cultivadas en condiciones no adherentes que favorecenla formación de estructuras esféricas. Para este fin se utilizó un medio de selección suplementadocon EGF, bFGF y B27. Las células GH3 fueron transducidas con un vector retroviral queexpresa Sox2 y GFP. Se realizó inmunofluorescencia para la detección de marcadores asociadosa CS y CSC: GFRa2, Sox2, Oct4, Nestin, CD133 y CD44 y el análisis morfológico ultraestructuralen ambos modelos tumorales. El metabolismo y la viabilidad celular de GH3 se determinaron por elensayo de AlamarBlue, y proliferación mediante la incorporación de timidina tritiada.Las pituesferas obtenidas fueron positivas para los marcadores antes mencionados y luego de ladiferenciación con medio suplementado, expresaron S100, vimentina y GFAP. La sobre-expresiónde Sox2 en células GH3 indujo cambios ultraestructurales indicativos de un fenotipo celular más indiferenciado.También se observó un incremento en el número de figuras mitóticas, en la capacidadde formar esferoides y en el metabolismo y la viabilidad celular con respecto a las GH3 control.Estos resultados muestran que las CS forman parte de la masa tumoral hipofisaria y que el factorde transcripción Sox2, induce un fenotipo celular más indiferenciado, lo cual sugiere un rol activo enla tumorogénesis hipofisaria.