Bronchiolar epithelium participation in the neonatal prevetion of asthma.

GARCÍA LN, SCALERANDI MV, URIBE ECHEVARRÍA EM, LEIMGRUBER C, QUINTAR AA AND MALDONADO CA

Congreso; IMMUNOCOLOMBIA 2015 - 11th Congress of the Latin American Association of Immunology; 2015

Although the susceptibly for allergic disease has a hereditary element, the current worldwide  raise in asthma prevalence have evidenced that environmental changes are also implicated. A  possible explanation for this phenomenon has been suggested by the so­called hygiene  hypothesis, based on epidemiological studies. This hypothesis states that the urban hygienic  conditions skip the early­life exposure to microbes hence they are clue to promote innate  immune activation by signaling through the Toll­like receptors (TLRs) and thus preventing the  allergic response. Even though the way this microbial stimuli exert such prevention is still not  well know, the use of murine models have highlighted the possible compensatory mechanisms  involved.  Nowadays, a growing body of genetic and clinical data highlights the need to consider the role of  structural components of the airway in the onset and development of asthma. In particular the  epithelium is central, because this is the site where an inflammatory or non­inflammatory  decision must first be made to inhaled allergen. In these sense, at bronchiolar level, the  epithelial Club cells (CC) are key contributors for local homeostasis.  Under normal conditions these cells detoxify xenobiotics as well as oxidant gasses, participate in  mucociliary clearance of environmental agents and through their pluripotencial capacity, they  are involved in the epithelial maintenance and repair. In addition, these cells modulate the local  inflammation by secreting the anti­inflammatory Club cell secretory protein (CCSP) and  participate in the innate immune response through the secretion of the collectins surfactant  protein (SP) A and D as well as several cytokines and chemokines. Among these mediators, it  has been reported that both, CCSP and SP­D, exhibited Th2­ immunomodulatory effect.­Beside  these lung protective functions, CC also have been linked to the allergic remodeling process of  asthma, since they are the principal cells to produce eotaxin and undergo mucus metaplasia in  response to Th2 inflammation.  Previous results of our laboratory indicate that this mucous transdifferentiation induced the  diminution of the normal SP­D and CCSP content, while the intranasal stimulus with  Lipopolysaccharide (LPS) increase the Club cell expression of these proteins as well as the  receptor TLR4. OBJECTIVE: The aim of this study was to modify the microbial environment to which lung epithelium of  newborn Balb/c mice are exposed and study the possible influence on the subsequent  development of airway allergic inflammation to Ovolabumin (OVA).  MATERIAL AND METHODS Offspring Balb/c mice were intranasal (in.)pre­ exposed to 5μl of PBS or E. Coli  Lipopolysaccharide­LPS (200mg/ml), 3 times per week , between days 3 to 13 after birth. At the  age of 4 and 6 weeks, female mice were systemically sensitized by means of 100μl  intraperitoneal injection of OVA/Alumm (1mg/1mg/ml). Then, mice were assigned into groups  (n=10) and in. challenged on 10 consecutive days with OVA (1mg/ml) (LPSn/OVA and  PBSn/OVA group) or vehicle (LPSn and PBSn group). Twenty four hours later animals were  sacrificed, bronchoalveolar lavages (BAL) were performed and lung tissues were obtained. After  centrifugation BAL supernatant were reserved at ­20°C for ELISA assay while pellet were used  for flow cytometry (FC) analysis and differential cell count in cytospin slide with May GrünwaldAbout Submit Journals Research Topics 3 My frontiersSearch for articles, people, events and more. MARIA SCALERANDIEVENT ABSTRACT19/8/2015 Frontiers | Manage Abstracts | My Submissions | All Abstractshttp://www.frontiersin.org/Journal/MySubmissionViewDetails.aspx?stage=100&articleid=154253&submissionid=154918 2/3< BackGiemsa staining. The right lungs were processed for electron and light microscopy analysis as  well as immunohistochemistry (IC) and Alcian Blue (AB)­PAS staining. Moreover, to further investigate the changes primed by LPS­neonatal instillation in the  bronchiolar epithelium, a group of animals (n=6) (equally exposed to PBS or LPS) were  sacrificed at 20 days of live and epithelial­bronchiolar samples were obtained (20/animal) by  lasser dissection microscopy. RNA extractions followed by qRT­PCR were conducted in these  samples. RESULTS Ultrastructural analysis demonstrated in LPSn/OVA the preservation in the normal phenotype  of CC as well as a meaningful reduction (p