Análisis de la combinación de Benznidazol y Clomipramina sobre distintos aislamientos de Trypanosoma cruzi in vitro

FRENGÜELLI A; STRAUSS M; CUELLO M; LO PRESTI MS; BAZAN C; BAEZ A; VELÁZQUEZ D; MILER N; PAGLINI P; RIVAROLA HW

Santa Fe

Jornada; XVI Jornadas Argentinas de Microbiología; 2015

Asociación Argentina de Microbiología

La enfermedad de Chagas o trypanosomiasis americana es una infección causada por el parásito protozoo Trypanosoma cruzi. Se presenta en 21 países de Latino América y afecta a unos 8 a 12 millones de personas. La especie está compuesta por diversas subpoblaciones que exhiben un alto grado de polimorfismo, presentando distintas características biológicas y distinto comportamiento frente a la acción de fármacos. Estas han sido agrupadas en seis grandes grupos o linajes que van de T. cruzi I a VI. El Benznidazol (BZ) y el Nifurtimox son los únicos fármacos disponibles para el tratamiento de la enfermedad de Chagas. Sin embargo, numerosos efectos adversos condicionan su uso. En la búsqueda de nuevos blancos terapéuticos para el tratamiento de la enfermedad, la enzima tripanotiona reductasa, exclusiva de Kinetoplastide, es una interesante alternativa y Clomipramina (CLO) es un inhibidor directo de dicha enzima. Existen evidencias de que la asociación de dos o más drogas que actúen con diferentes mecanismos de acción potencia el efecto terapéutico, pudiendo de esta forma disminuir la dosis habitual de cada fármaco individual. Por ello, el objetivo del presente trabajo fue evaluar la citotoxicidad y el efecto combinado de BZ+CLO sobre tres aislamientos de T. cruzi compuestos por una mezcla de linajes.Se utilizaron tripomastigotes de Trypanosoma cruzi pertenecientes a tres aislamientos diferentes: el aislamiento SGO Z12 obtenido de Santiago del Estero, zona endémica de nuestro país y dos aislamientos de T. cruzi obtenidos de individuos con infección congénita: Lucky y Casibla. Los tres fueron caracterizados previamente y se encontró que todos están compuestos por la mezcla de linajes Tc II y VI. Para realizar el ensayo de citotoxicidad (MTT) se aplicó la metodología Denizot (1986) sobre la línea celular LLCMK2. Se incubó 2,5.105cel/mL con BZ=62,5-1000µg/mL y CLO=25-1000µg/mL, en placas de 96 pozos. Para determinar el efecto combinado de las drogas se incubaron 1,106trypomastigotes/mLde cada uno de los aislamientos con BZ=0,125-1,0µg/mL y CLO=0,45-7,8µg/mLen placas de 96 pozos. Se calculó el Índice de Combinación (CI> 1 antagonismo; CI= 1 aditivo; CI< 1 sinérgico) y graficó el isobolograma. El ensayo se realizó por triplicado. La combinación de BZ+CLO mostró un comportamiento antagónico en células LLCMK2 (CI=1,26). Los aislamientos de T. cruzi presentaron un comportamiento diferencial cuando fueron incubados con las drogas y presentaron un efecto levemente sinérgico en el aislamiento Casibla (CI=0,96) y sinérgico en los aislamientos Z12 (CI=0,80) y Lucky (CI=0,58). La asociación CLO+BZ demostró no ser citotóxica sobre células de mamíferos, considerándose potencialmente segura para la farmacoterapia de la Enfermedad de Chagas. Las diferencias observadas en los Índices de Combinación evidenciaría la sensibilidad diferencial a las drogas de las subpoblaciones de T. cruzi presentes dentro de un mismo linaje. En base a los resultados obtenidos, la combinación de CLO+BZ podría ser considerada una potencial estrategia quimioterapéutica más efectiva y segura.