EL ÁCIDO LITOCÓLICO, UN NUEVO PROTECTOR DE LA ABSORCIÓN INTESTINAL DE CALCIO EN CONDICIONES OXIDANTES

MARCHIONATTI A; PEREZ A; RIVOIRA M; RODRIGUEZ V; TOLOSA DE TALAMONI N

Jornada; Reunión Anual de SEMCO; 2015

Losácidos biliares (AB) y sus sales son los principales componentes de la bilis. Losácidos litocólico (LCA) y la sal sódica del deoxicólico (NaDOC) son ácidosbiliares secundarios originados a partir de los primarios por acción de lamicroflora del intestino. En un trabajo previo de nuestro laboratorio se demostró que el NaDOC, por un mecanismooxidativo, inhibe la absorción intestinal de Ca+2 y afecta lasupervivencia celular (Rivoira y col., Comp. Biochem. Physiol., 2012). Dado que el LCA es unligando del VDR, nuestra hipótesis es que el LCA estimula la absorciónintestinal de Ca2+ y puede neutralizar el efecto inhibitorio deNaDOC. En base a esto nos planteamos como objetivo conocer los efectos que el LCA  puededesencadenar en el intestino, sus implicancias sobre la vía transcelular de la absorcióndel catión y los mecanismos subyacentes, enausencia y presencia de NaDOC. Paraello se utilizaron pollos de 4 semanas de edad, divididos en 4 grupos ytratados en el saco intestinal con: 1) solución fisiológica (controles), 2) NaDOC(10 mmol/L), 3) LCA (0,2 mmol/L) y 4) tratados con LCA+NaDOC con igual dosis.Todos fueron tratados por  30 minutos. Laabsorción intestinal de Ca+2 se midió por la técnica del asaintestinal ligada in situ. En mucosaduodenal se analizó la expresión génica por qPCR de Ca+2-ATPasa,intercambiador Na+/Ca+2, calbindina D28k yTRPV6,. Además se estudió la expresión proteica de Ca+2-ATPasa,intercambiador Na+/Ca+2, calbindina D28k, FASy FASL por Western blot. Se midieron la actividad de fosfatasa alcalina intestinal(FAI), el contenido de grupos carbonilos de las proteínas, los niveles de .O2- yla actividad de caspasa 3 por espectrofotometría. En mitocondrias aisladas deenterocitos, se estudiaron los cambios en la permeabilidad de la membranainterna mitocondrial por espectrofotometría. Los resultados se evaluaronestadísticamente mediante ANOVA a una vía, seguido del test de Bonferroni. Losresultados indican que LCA solo no alteró la absorción intestinal de Ca2+,mientras que el tratamiento combinado previno el efecto inhibitorio causado porNaDOC sobre la absorción intestinal de Ca+2 y retornó los valores deexpresión génica y proteica de Ca+2-ATPasa, intercambiador Na+/Ca+2, calbindina D28k y TRPV6, moléculas involucradas en la vía transcelular, a los valores controles. LCA evitó el incremento en el contenido de grupos carbonilos, del .O2- y de la actividad de caspasa 3. También normalizó la actividad de FAI y la alteración de la permeabilidad de la membrana interna mitocondrial producidas por NaDOC. La vía extrínseca de la apoptosis desencadenada por NaDOC fue bloqueada por el co-tratamiento con LCA. En conclusión, LCA protege la absorción intestinal de Ca2+ contra los efectos adversos causados ​​por NaDOC y evita la reducción del movimiento transcelular de Ca2+ mediante bloqueo del estrés oxidativo y de la apoptosis desencadenados por NaDOC, normalizando la expresión génica y proteica de las moléculas implicadas en el movimiento de Ca2+ desde el lumen a la sangre.