EL ÁCIDO LITOCÓLICO, UN NUEVO PROTECTOR DE LA ABSORCIÓN INTESTINAL DE CALCIO EN CONDICIONES OXIDANTES

MARCHIONATTI AM; PEREZ A; RIVOIRA M.A; RODRÍGUEZ V; TOLOSA DE TALAMONI N

Córdoba

Congreso; Reunión Anual de SEMCO; 2015

Los ácidos biliares (AB) y sus sales son los principales componentes de la bilis. Los ácidos litocólico (LCA) y la sal sódica del deoxicólico (NaDOC) son AB biliares secundarios originados a partir de los primarios por acción de la microflora del intestino. En un trabajo previo de nuestro laboratorio se demostró que el NaDOC, por un mecanismo oxidativo, inhibe la absorción intestinal de Ca+2 y afecta la supervivencia celular (Rivoira y col., Comp. Biochem. Physiol., 2012). Dado que el LCA es un ligando del VDR, nuestra hipótesis es que el LCA puede estimular la absorción intestinal de Ca2+ y neutralizar el efecto inhibitorio de NaDOC. En base a esto nos planteamos como objetivo conocer los efectos que el LCA puede desencadenar en el intestino, sus implicancias sobre la vía transcelular de la absorción del catión y los mecanismos subyacentes, en ausencia y presencia de NaDOC. Para ello se utilizaron pollos de 4 semanas de edad, divididos en 4 grupos y tratados en el saco intestinal con: 1) solución fisiológica (controles), 2) NaDOC (10 mmol/L), 3) LCA (0,2 mmol/L) y 4) tratados con LCA+NaDOC en las mismas dosis. Todos fueron tratados por 30 minutos. La absorción intestinal de Ca+2 se midió por la técnica del asa intestinal ligada in situ. En mucosa duodenal se analizó la expresión génica por qRT-PCR de Ca+2-ATPasa, intercambiador Na+/Ca+2, calbindina D28k y TRPV6. Además se estudió la expresión proteica de Ca+2-ATPasa, intercambiador Na+/Ca+2, calbindina D28k, FAS y FASL por Western blot. Se midieron la actividad de fosfatasa alcalina intestinal (FAI), el contenido de grupos carbonilos de las proteínas, los niveles de .O2- y la actividad de caspasa-3 por espectrofotometría. En mitocondrias aisladas de enterocitos, se estudiaron los cambios en la permeabilidad de la membrana interna mitocondrial por espectrofotometría. Los resultados se evaluaron estadísticamente mediante ANOVA, seguido del test de Bonferroni. Los resultados indican que LCA solo no alteró la absorción intestinal de Ca2+, mientras que el tratamiento combinado previno el efecto inhibitorio causado por NaDOC sobre la absorción intestinal de Ca+2 y retornó los valores de expresión génica y proteica de Ca+2-ATPasa, intercambiador Na+/Ca+2, calbindina D28k y TRPV6, moléculas involucradas en la vía transcelular, a los valores controles. LCA evitó el incremento en el contenido de grupos carbonilos y del .O2-, así como el aumento de la actividad de caspasa-3 causados por NaDOC. También normalizó la actividad de FAI y la alteración de la permeabilidad de la membrana interna mitocondrial producidas por NaDOC. La vía extrínseca de la apoptosis desencadenada por NaDOC fue bloqueada por el co-tratamiento con LCA. En conclusión, LCA protege la absorción intestinal de Ca2+ contra los efectos adversos causados por NaDOC y evita la reducción del movimiento transcelular de Ca2+ mediante bloqueo del estrés oxidativo y de la apoptosis desencadenados por NaDOC, normalizando la expresión génica y proteica de las moléculas implicadas en el movimiento de Ca2+ desde el lumen a la sangre.