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Un desafío en endocrinología es conocer factores implicados en la neogénesis de adenomas hipofisarios en los que participarían células iniciadoras de tumores (CIT) con fenotipo de cancer stem cells (CSC). El objetivo de este trabajo es analizar la población de células stem (CS) con marcadores específicos (GFRa2 y Sox2) y de CS con fenotipo CSC (Nestin, CD133 y CD44), durante el desarrollo de tumores hipofisarios y posterior aislamiento y caracterización de las CIT. Los tumores fueron obtenidos en ratas hembras Fischer tratadas con pellets de 30mg de benzoato de estradiol (BE), durante 5 (BE5), 10 (BE10), 20 (BE20) y 30 (BE30) días y ratas en diestro como control (C). El desarrollo del adenoma fue caracterizado mediante trama de reticulina. La expresión de los marcadores de CS y CSC se analizó por inmunofluorescencia, western blot y RT-PCR. Para los estudios in vitro, se aislaron pituesferas a partir de suspensiones celulares de adenomas (BE30) en cultivo. La detección de marcadores se realizó en secciones de crioultramicrótomo de los esferoides realizándose además, ensayos de diferenciación. En zona marginal (ZM) de hipófisis de rata C, se observaron núcleos Nestin+, células CD133+ y escasa inmunomarcación de ambos en adenohipófisis (AH).En contraposición, en BE30 la expresión de estos marcadores disminuyó en ZM y aumentó en AH, observándose nichos de células Nestin+ y CD133+, indicando un cambio en la distribución de CS desde ZM hacia el parénquima. Además, la expresión de ARNm de CD133 y CD44 incrementaron progresivamente durante del tratamiento estrogénico, a diferencia de la observada para Sox2, la cual se mantiene constante en los estadíos analizados. La expresión de GFRa2, Nestin y CD44 evaluada por Western Blot, mostró un incremento significativo en hipófisis de ratas BE5. Las pituesferas aisladas en cultivo fueron positivas para: GFRa2, Sox2, Oct4, Nestin, CD133 y CD44 y luego de la diferenciación expresaron S100, vimentina y GFAP. El aumento en la expresión de marcadores de CS y CSC en etapas tempranas del desarrollo tumoral, conjuntamente con la caracterización y diferenciación de CS en cultivo a partir del adenoma, indicarían la participación esta población celular en la formación del adenoma hipofisario.