La riboflavina como eficiente fotosensibilizador en el tratamiento de células de carcinoma escamoso

ANDREA VIRGINIA JUAREZ; ERNESTO HAGGI; ALICIA TORRES; PATRICIA PONS

Rio Gallegos

Congreso; IV Congreso Iberoamericano de Productos Naturales en Patagonia: La diversidad química y biológica; 2014

Universidad Nacional de la Patagonia Austral, Secretaria de Ciencia y Tecnología

La riboflavina (RF) es uno de los componentes del complejo vitamínico B2 y es endógena de todas las células aeróbicas. Por su eficiente propiedad fotosensible se ha propuesto emplearla como fotosensibilizador en terapia fotodinámica (TFD), ya que puede actuar por mecanismos fotoquímicos tipos I y II. La TFD es una modalidad terapéutica aprobada para el tratamiento del cáncer, basada en la activación lumínica de un FS localizado selectivamente en células neoplásicas causando su muerte por la fotooxidación de materiales biológicos. Objetivo: Estudiar la respuesta de células humanas de carcinoma escamoso (SCC-13) a la activación lumínica de RF empleando 444nm de longitud de onda. Para determinar la dosis de RF no tóxica para las células SCC-13, las mismas fueron incubadas con RF por diferentes tiempos y diferentes concentraciones evaluando la viabilidad celular. Posteriormente las células fueron incubadas con RF e irradiadas con una lámpara de LED`s de alta potencia ( 444 nm, 4.5, 9, 18, 27 J/cm2), se demostró que la RF en dosis menores a 50μM por 3h no es citotóxica, pero en combinación con irradiación, genera disminución de la viabilidad en forma dosis de luz dependiente. La TFD-RF generó alteración en el ciclo celular con aumento en las fases S y G2/M. Posteriormente se evaluó el tipo de muerte celular, por microscopia electrónica (ME) y los estudios morfológicos ultraestructurales evidenciaron que las células luego de la TFD presentaron características propias del proceso apoptótico, como condensación de la cromatina, fragmentación nuclear y presencia de cuerpos apoptóticos. Por otro lado, se determinaron los niveles intracelulares de especies reactivas de oxígeno (ROS) con 2,7-dihidro dicloro fluoresceína (H2DCFDA) por citometría de flujo y microscopía de fluorescencia y se evidenció el aumento de ROS en las células tratadas respecto a las controles. Por último se demostró que el aumento de ROS genera daño oxidativo en proteínas, determinado por el contenido de grupos carbonilos de las proteínas, basado en la reacción con dinitrofenilhidrazina. En base a estos resultados, RF podría ser un efectivo FS en TFD, la citotoxicidad generada por la TFD con RF podría atribuirse al aumento de los niveles intracelulares de ROS causando la oxidación de proteínas y la subsiguiente muerte de las células cancerosas.