AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN DE CÉLULAS INICIADORAS DE TUMORES CON FENOTIPO CANCER STEM CELL EN ADENOMAS HIPOFISARIOS EXPERIMENTALES

GUIDO C; VACA A; SOSA LDV; VELAZQUEZ F; CAPUTTO B; MUKDSI JH; TORRES AI

Mar del Plata

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC).; 2014

Un desafío en endocrinología es conocer factores implicados en la neogénesis de adenomas hipofisarios en los que participarían células iniciadoras de tumores (CIT) con fenotipo cancer stem cell (CSC). El objetivo fue evaluar cambios de los marcadores de CSC: CD133, Nestin y de células stem (CS): GFRa2; durante el desarrollo de tumores hipofisarios y posterior aislamiento y caracterización de las CIT. Los tumores se obtuvieron en ratas hembras Fischer tratadas con 30mg de benzoato de estradiol (BE), durante 5, 10, 20 y 30 (BE30) días. Como control (C) se emplearon ratas en diestro. El desarrollo del adenoma fue evaluado con trama de reticulina. La expresión de Nestin y CD133 fue analizada por inmunofluorescencia y el ARNm de CD133 y GFRa2 por RT-PCR. Para estudios in vitro, se aislaron pituesferas en cultivo a partir de suspensiones celulares de adenomas (BE30). La caracterización se realizó con marcadores específicos en cortes de crioultramicrótomo y luego se sometieron a diferenciación. Nestin y CD133, presentaron variaciones en su distribución en hipófisis durante el tratamiento. En zona marginal (ZM), que limita el cleft hipofisario donde se describe la presencia de CS, se observaron núcleos Nestin+, células CD133+ y escasa inmunomarcación de ambos en adenohipófisis (AH) de ratas C. En contraposición, en BE30 la expresión de los marcadores mencionados disminuyó en ZM y aumentó en AH, observándose nichos de células Nestin+ y CD133+. Además, la expresión del ARNm de CD133 incrementó progresivamente durante el tratamiento estrogénico decayendo en BE30, a diferencia de GFRa2 cuya máxima expresión se observa en C. Las pituesferas en cultivo fueron positivas para: GFRa2, Sox2, Oct4, Nestin, CD133 y CD44, y luego de la diferenciación fueron positivas para S100, vimentina y GFAP. Los cambios en la expresión de marcadores de CS y CSC descriptos en ZM y AH, el aislamiento y caracterización de pituesferas, indican su participación en el desarrollo de adenomas hipofisarios.